Определение электролитов крови и мочи

Определение хлоридов в крови по методу Рушняка

Оснащение рабочего места

1. Штативы.
2. Микропипетки.
3. Градуированные пипетки на 2, 10 мл.
4. Капельницы.
5. Колбочки на 50 мл.
6. Микробюретки.
7. Шпатели.
8. Асбестовые сетки.
9. Электрическая плитка.
10. Азотнокислое серебро (AgN03).
11. Роданистый аммоний (NH4CNS).
12. Концентрированная азотная кислота.
13. Марганцовокислый калий (КМп04).
14. Железоаммиачные квасцы NH4Fe(S04)2.
15. Химически чистая глюкоза.
16. Хлористый натрий.
17. Двухромовокислый калий (К2СГ2О7).

Сущность метода

Сущность метода состоит в том, что в результате взаимодействия азотнокислого серебра с хлоридами образуется хлористое серебро. Так как азотнокислое серебро добавляют в избытке, оставшуюся его часть оттитровывают роданистым аммонием в присутствии железоаммиачных квасцов, участвующих в реакции в качестве индикатора.

Для данного метода необходимы следующие реактивы:

1. 0,1 N раствор азотнокислого серебра: 8,493 г азот¬нокислого серебра взвешивают на аналитических весах в закрытой стеклянной посуде, растворяют дистиллирован¬ной водой в мерной колбе на 500 мл и доводят водой до метки.
2. 0,01 N раствор азотнокислого серебра: в мерную колбу на 100 мл наливают 10 мл 0,1 N раствора AgN03 и доводят дистиллированной водой до метки.

Титр приготовленного реактива проверяют точным 0,01 N раствором поваренной соли (0,5845 г поваренной соли растворяют небольшим количеством воды в мерной колбе на 1 л и доводят водой до метки).

Проверка титра 0,01 N раствора AgN03

К 5 мл 0,01 N раствора NaCl прибавляют несколько капель 3,5% раствора двухромовокислого калия в качестве индикатора. Смесь титруют при постоянном помешивании 0,01 N раствором AgN03. В прозрачной светло-желтой жидкости выпадает белый осадок хлористого серебра. Титрование продолжают до появления кирпично-красного окрашивания, что обусловлено взаимодействием азотно-кислого серебра с индикатором К2СГ2О7. Вычисляют коэффициент поправки, который используют при оконча¬тельном расчете результатов.

3. 0,01 N раствор роданистого аммония (NH4CNS): 0,76 г роданистого аммония помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют в 500-600 мл воды и доводят до метки дистиллированной водой. Титр реактива проверяют по точному 0.01 N раствору AgN03. Лучше готовить 0,1 N раствор родапистого аммония, а из него 0,01 N раствор.

4. 60% азотная кислота: 7,2 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,385 выливают в мерную колбу на 100 мл и доливают до метки дистиллированной водой.

5. Насыщенный раствор марганцовокислого калия: 6,4 г вещества растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

6. Насыщенный раствор железоаммиачных квасцов: 44,15 г вещества растворяют в 100 мл воды.

Техника определения

На рабочем месте устанавливают четыре химических стаканчика, нумеруют их и во все стаканчики наливают по 2 мл дважды дистиллированной воды (бидистиллята). Затем микропипеткой набирают из пальца по 0,1 мл крови, вытирают копчик пипетки ватой и вносят в два первых (опытных) стаканчика. Пипетку промывают верхним прозрачным слоем воды, прибавив во все стаканчики точно но 2 мл 0,01 N раствора азотнокислого серебра, по 10 капель 60% азотной кислоты и по 15-20 капель насыщенного раствора марганцовокислого калия, их ставят на нагревательный прибор с одной-двумя асбестовыми сетками и кипятят в течение 3-5 минут. Во избежание выплескивания пенящейся жидкости содержимое стаканчиков периодически взбалтывают. Фиолетовый цвет растворов не должен исчезнуть.

Затем во все стаканчики добавляют по щепотке глюкозы, которая приводит к восстановлению перманганата, в результате чего раствор обесцвечивается. После обесцвечивания содержимого стаканчики снимают, охлаждают и прибавляют в них в качестве индикатора по щепотке железоаммиачных квасцов или по 2-5 капель их насыщенного раствора.

Содержимое стаканчиков титруют 0,01 N раствором роданистого аммония до розового окрашивания и производят расчет. Известно, что 1 мл 0,01 N раствора AgNC>3 соответствует 0,585 мг NaCl. Допустим, что на оттитровывание исследуемого раствора израсходовано 0,95 мл 0,01 N роданистого аммония, а на контроль — 1,98 мл. Так как в каждый стаканчик было взято по 2 мл раствора AgN03, то на титрование NaCl крови в опытных стаканчиках израсходовано 2—0,95 = 1,05 мл 0,01 N раствора AgN03, на титрование содержимого контрольных колбочек (проверка реактивов) — 2— 1,98 = 0,02 мл. Следовательно, с хлоридами крови связано 1,05 — 0,02 = 1,03 мл 0,01 N раствора AgN03. Известно, что 1 мл 0,01 N раствора AgN03 соответствует 0,585 мг NaCl. Отсюда в 100 мл крови (т. е. в мг%) содержание хлоридов составляет:

0,585X1.03X100 =602 6 0,1

где 0,585 — количество NaCl в миллиграммах; 1,03 — количество 0,01 N раствора AgN03, пошедшего на титрование пробы с кровью в миллиграммах; 0,1 — количество крови в пробе в миллиграммах; 100 — коэффициент перевода в проценты.

При расчете учитывают поправочные коэффициенты раствора азотнокислого серебра и роданистого аммония. В норме хлоридов в крови: 500—570 мг.

Определение хлоридов в моче по методу Мора

Оснащение рабочего места

1. Штативы.
2. Градуированные пипетки на 1, 2 мл.
3. Капельницы.
4. Микробюретки.
5. Уксуснокислый натрий (CH3COONa).
6. Ледяная уксусная кислота.
7. Хромовокислый калий (К2Сг04).

Для исследования необходимо суточное количество мочи.

Сущность метода

Количественное определение хлоридов по методу Мора основано на титровании хлора азотнокислым серебром. Мочу титруют раствором AgNC>3 в присутствии хромовокислого калия, в результате чего образуется кирпично-красный осадок хромовокислого серебра.

Для данного метода необходимы следующие реактивы:

1.  Смесь уксуснокислого натрия и уксусной кислоты: взвешивают 10 г уксуснокислого натрия, навеску количественно переводят в мерную колбу на 100 мл, растворяют небольшим количеством 3% уксусной кислоты и этим же раствором доводят до метки.
2. 2% раствор хромовокислого калия (К2СГО4): 2 г реактива растворяют в колбе на 100 мл небольшим количеством бидистиллированной воды и доливают водой до метки.
3. Раствор азотнокислого серебра: взвешивают 29,060 г азотнокислого серебра и растворяют в 1 л дистиллированной воды. 1 мл приготовленного раствора азотнокислого серебра вступает в реакцию с 10 мг NaCl.

Техника определения

Измеряют суточное количество мочи. В колбочку для титрования наливают 0,2 мл мочи, добавляют 1,8 мл дистиллированной воды, 0,5 мл смеси уксуснокислого натрия и уксусной кислоты и 2 капли 2% раствора хромовокислого калия. Полученную смесь титруют раствором азотнокислого серебра до едва заметного изменения светло-коричневого цвета в кирпично-красный. Затем производят расчет. Известно, что 1 мл AgNC>3 соответствует 10 мг NaCl. Вычисление производят по формуле:

х = aх5х10хб,

где а — количество раствора AgN03, пошедшее на титрование 0,2 мл мочи, в мл; 5 — пересчет па 1 мл мочи; 10 — количество NaCl, соответствующее 1 мл раствора AgN03, в мг; б — суточный объем мочи.

Пример расчета

На титрование пошло 0,16 мл AgN03, суточный объем мочи 1500 мл.

х = 0,16X5X10X1500=12000 мг=12 г.

В норме хлоридов в моче 8-15 г.

Примечание. При оформлении результатов исследования хлориды крови выражают в миллиграмм-процентах, а в суточном количестве мочи — в граммах.

Определение кальция в крови по методу де Ваарда

Оснащение рабочего места

1. Штативы.
2. Центрифужные пробирки с заостренным концом.
3. Градуированные пипетки на 1-10 мл.
4. Микробюретки.
5. Водяная баня.
6. Центрифуга.
7. Щавелевокислый аммоний.
8. Концентрированная серная кислота.
9. Марганцовокислый калий (KMnO-i).

Для исследования необходима сыворотка крови.

Сущность метода

Сущность метода заключается в следующем. Кальций осаждают из сыворотки крови в виде щавелевокислого кальция (оксалата кальция). При растворении оксалата кальция в серной кислоте освобождается щавелевая кислота. Количество щавелевой кислоты определяют путем титрования марганцовокислым калием, в результате чего узнают количество кальция, которое было с ней связано.

Для проведения исследования пользуются следующими реактивами:

1. Насыщенный раствор химически чистого щавелевокислого аммония: 4 г реактива всыпают в колбочку на 10 мл и доливают водой до метки.
2. 5% раствор серной кислоты: в колбочку на 100 мл наливают 50-60 мл дистиллированной воды, приливают 2,71 мл концентрированной серной кислоты и доливают водой до метки.
3.  2% раствор аммиака: в колбочку на 100 мл помещают 8 мл 25% аммиака и доливают дистиллированной водой до метки.
4. 0,1 N КМпС>4. На техно-химических весах взвешива¬ют 1,6 г КМп04, растворяют в 200—300 мл дистиллированной воды в мерной колбе на 500 мл и доводят водой до метки.

Поскольку раствор нестоек, его сохраняют в посуде из темного стекла и через неделю после приготовления проверяют титр по 0,1 N раствору щавелевой кислоты.

С этой целью в химический стаканчик наливают 5 мл 0,1 N раствора щавелевой кислоты и прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты. Смесь подогревают до 80-90° и титруют из бюретки 0,1 N раствором КМпСЬ до появления не исчезающего в течение одной минуты слабо розового окрашивания.

Учитывают количество ушедшего на титрование раствора 0,1 N КМп04 и рассчитывают, если необходимо, коэффициент поправки.

5. 0,01 N раствор КМп04. Приготовляют перед постановкой исследования из 0,1 N раствора КМп04. Для этого 10 мл 0,1 N раствора КМпС>4 наливают в мерную колбочку на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки.

Техника определения

В штатив устанавливают четыре центрифужные пробирки с заостренным концом (рис. 90) и нумеруют их. В первые две (опытные) пробирки наливают по 1 мл негемолизироваиной сыворотки, а в две другие (контрольные) по 1 мл бидистиллированной воды. Во все четыре пробирки прибавляют по 1 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония, оставляют на 30-60 минут и центрифугируют в течение 5 минут при 1500-2000 об/мин; щавелевокислый кальций образует в острие конуса пробирок плотный осадок. Жидкость из всех пробирок быстро сливают. Над осадком остается лишь очень небольшое количество жидкости. В пробирки наливают 4 мл 2% аммиака и смешивают с ним оставшуюся над осадком жидкость. Это проделывают не менее 3 раз для того, чтобы совершенно отделить от осадка жидкость, содержащую щавелевокислое соединение.

Рисунок 90. Пробирка де Ваарда и пипетка к ней

После этого из всех пробирок сливают раствор аммиака, в каждую из них добавляют по 1 мл 5% раствора серной кислоты и осадок размешивают. Поочередно нагрев все пробирки в кипящей водяной бане в течение 1 минуты, их сразу же титруют 0,01 N раствором марганцовокислого калия до появления слабо розовой окраски, не исчезающей в течение 1-2 минут. Титрование проводят на белом фоне.

Отмечают количество раствора КМПО4, пошедшего па титрование, и производят расчет, исходя из того, что 1 мл израсходованного на титрование 0,01 N раствора КМп04 соответствует 0,2 мг кальция. Количество кальция будет равно:

{а - б) X 0,2 Х 100,

где а — количество 0,01 N раствора КМп04, ушедшее на титрование опытных проб, в миллилитрах; б — количество 0,01 N раствора КМп04, ушедшее на титрование конт¬рольных проб, в миллилитрах; 0,2 — количество кальция, соответствующее 1 мл 0,01 N раствора КМп04, в миллиграммах; 100 — коэффициент перевода в проценты.

Пример расчета

Допустим, что на титрование двух опытных проб ушло в среднем 0,7 мл 0,01 N раствора КМп04, а на титрование двух контрольных проб — 0,1 мл 0,01 N раствора КМп04.

Количество кальция в исследуемой сыворотке будет равно:

(0,7-0,1)Х0,2Х100=12 мг%.

В норме кальция в крови 9-12 мг%.

Определение калия в крови по методу Крамера и Тисдаля

Оснащение рабочего места

1. Штативы.
2. Центрифужные пробирки.
3. Градуированные пипетки на 1 —10 мл.
4. Пипетки с оттянутым узким концом.
5. Микробюретки.
6. Центрифуга.
7. Водяная баня.
8. Хлористый калий (КС1).
9. Азотнокислый кобальт.
10. Азотнокислый натрий (NaN03).
11. Щавелевая кислота.
12. Бидистиллированная вода.

Для исследования необходима сыворотка крови.

Сущность метода

Осаждение калия из сыворотки крови производят с помощью реактива, содержащего кобальт. Образующееся при взаимодействии калия и кобальтового реактива соединение выпадает в осадок; его оттитровывают марганцовокислым калием в кислой среде. В этом и состоит сущность метода. Для проведения исследования необходимы следующие реактивы:

1. Стандартный раствор хлористого калия: 0,3815 г КС1 растворяют небольшим количеством дистиллированной воды в колбочке на 100 мл и доводят водой до метки (1 мл раствора содержит 0,2 мг калия).
2. Кобальтовый реактив. Сначала готовят два раствора — № 1 и 2. Раствор № 1. Взвешивают 25 г азотнокислого кобальта, навеску переводят в колбочку, добавляют 12,5 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл дистиллированной воды. Раствор № 2. Взвешивают 120 г азотнокислого натрия, переводят в колбочку и доливают 180 мл воды. В склянку Дрекселя наливают весь приготовленный раствор № 1 и добавляют 210 мл раствора № 2. С помощью водоструйного насоса в течение нескольких дней по нескольку часов каждый раз просасывают воздух до тех пор, пока не исчезнет запах окислов азота. В результате реактив должен стать прозрачным. Хранят его в темном прохладном месте и используют в работе 1—2 месяца. Перед исследованием необходимо вновь пропустить через реактив воздух и профильтровать его.
3. 0,1 N и 0,01 N растворы КМп04 (1 мл 0,01 N раствора КМп04 соответствует 0,071 мг калия). Коэффициент 0,071 для расчета калия непостоянен. Это зависит от чистоты кобальтового реактива. Поэтому делают проверку по точному стандартному раствору КС1, содержащему 0,2 мг% калия; обрабатывают и титруют его, как в опыте. Узнав количество потраченного КМп04 (например 3,4 мл), находят искомый коэффициент, разделив 0,2 на 3,4 (результат 0,0586). При работе с данным реактивом множат не на 0,071, а на 0,0586.
4. 0,1 N раствор щавелевой кислоты: 3,15 г перекристаллизованной щавелевой кислоты взвешивается на аналитических весах и помещается в 500-миллилитровую мерную колбу. Объем воды доводится до метки.
5. 0,01 N раствор щавелевой кислоты: в мерную колбочку на 100 мл наливают 10 мл 0,1 N раствора щавелевой кислоты и дистиллированной водой доводят до метки.
6. 20% раствор H2S04: в мерную колбочку на 100 мл наливают 60-70 мл дистиллированной воды, прибавляют 10,84 мл концентрированной Нг304 и доводят водой до метки.

Техника определения

В штатив устанавливают четыре предварительно пронумерованные центрифужные пробирки и в первые две из них (опытные) наливают по 1,0 мл сыворотки крови, а в остальные две (контрольные) — по 1 мл бидистиллированной воды. Во все четыре пробирки добавляют по 2 мл кобальтового реактива и оставляют их на 45-60 минут, периодически встряхивая содержимое опытных пробирок (это способствует лучшему выпадению ярко-желтого осадка калия). Во все пробирки прибавляют по 3 мл бидистиллированной воды и центрифугируют в течение 15 минут. После этого из всех пробирок жидкость сливают и трижды промывают осадки так, как при определении кальция в крови по де Ваарду. В результате промывания жидкость над осадком становится бесцветной.

Во все четыре пробирки приливают по 1 мл 20% раствора H2SO4. Чтобы быстрее растворить осадки, пробирки слегка подогревают на водяной бане, прибавляют по 2 мл 0,01 N раствора КМпС>4, в результате чего содержимое пробирок окрашивается в розовый цвет. Пробирки поочередно устанавливают на 1-2 минуты в кипящую водяную баню. Если раствор обесцвечивается, к нему приливают из бюретки по каплям 0,01 N раствор КМ11О4 до получения слабо розовой окраски. Количество израсходованного 0,01 N раствора КМп04 записывают. Содержимое этой же пробирки титруют 0,01 N раствором щавелевой кислоты до полного обесцвечивания жидкости. Количество израсходованного на титрование 0,01 N раствора щавелевой кислоты записывают. Пробирку погружают на 30-60 секунд в водяную баню при температуре 60-80° и титруют 0,01 N раствором КМп04 до появления розового окрашивания раствора, не исчезающего в течение 60 секунд. Количество израсходованного 0,01 N раствора КМпС>4 записывают.

Аналогичным образом обрабатывают все остальные пробирки, записывают полученные результаты и рассчитывают количество калия в исследуемой сыворотке.

Пример расчета

а) Высчитывают количество калия в содержимом контрольных пробирок по формуле:

(а — б) X 0,071 X100,

где а — общее количество 0,01 N раствора КМ11О4 в миллилитрах; б — количество 0,01 N раствора щавелевой кислоты, пошедшей на титрование, в миллилитрах; 100— коэффициент перевода в проценты.

б) Высчитывают количество калия в содержимом опытных пробирок аналогичным образом.

в) Из количества калия, рассчитанного для содержимого опытных пробирок, вычитают количество калия, найденное в контрольных пробирках, и получают содержание калия в исследуемой сыворотке крови в миллиграмм-процентах.

Допустим, что общее количество 0,01 N раствора КМ11О4 в контрольных пробирках равно 2,2 мл (2 мл — первоначально добавленный объем и 0,2 мл, ушедшие на титрование), а количество затраченного на обесцвечивание 0,01 N раствора щавелевой кислоты — 1,2 мл.

Количество калия в контрольных пробирках будет равно:

(2,2-1,2)Х0,071X100=1X7,1=7,1 мг.

Общее же количество 0,01 N раствора КМп04 в опытных пробирках равно 3,9 мл (2 мл — первоначально добавленный объем, 0,5 мл — дополнительное количество 0,01 N КМп04 и 1,4 мл 0,01 N КМп04, израсходованное на титрование), а количество затраченного на обесцвечивание 0,01 N раствора щавелевой кислоты — 0,8 мл.

Количество калия в опытных пробирках будет равно:

(3,9-0,8jX0,071X100)=3,1X7,1=22 мг%.

Количество калия в исследуемой сыворотке будет равно:

22-7,1 = 14,9 мг%.

В норме калия в крови 16-24 мг%.