Форменные элементы крови, лейкоцитарная формула
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Окрашенные препараты нормальной крови.
- Микроскоп.
- Счетная клавишная машинка.
- Рисовальный аппарат.
- Цветные карандаши.
- Иммерсионное масло.
Изучение морфологии зрелых эритроцитов и различных лейкоцитов нормальной крови в окрашенных мазках
Структурные особенности форменных элементов крови изучают в тонких местах окрашенных препаратов иммерсионной системой микроскопа.
В препаратах крови здоровых людей обнаруживают: эритроциты, лейкоциты (палочкоядерные и сегменто-ядерные нейтрофилы. эозинофилы, базофилы, лимфоциты, моноциты) и тромбоциты.
Зрелый эритроцит (рис. 32, эр) - круглая или слегка овальная клетка, не содержащая ядра. Окрашивается в розовый цвет. В связи с тем что эритроцит имеет двояковогнутую форму, центр его представляется окрашенным слабее, чем периферия.
Метамиелоцит - юный нейтрофил (рис. 32, М). Клетка круглой формы. Цитоплазма окрашена в розоватый цвет и содержит пылевидную светло-фиолетовую (нейтрофильную) зернистость. Ядро почковидное, имеет гладкий контур без сужений, неравномерно окрашивается в оттенки фиолетового цвета, располагается ближе к периферии клетки.
Нейтрофил палочкоядерный (рис. 32, П) - клетка круглой формы. Цитоплазма розоватого цвета, содержит пылевидную светло-фиолетовую (нейтрофильную) зернистость. Характерным для этой клетки является наличие ядра, напоминающего жгут или палочку, изогнутую в виде букв S, С, Г и др. Ядро на всем своем протяжении не имеет сужений и окрашивается в фиолетовый цвет различной интенсивности.
Нейтрофил сегментоядерный (рис. 32, С) - круглой формы клетка с розовато окрашенной цитоплазмой, в которой имеется светло-фиолетовая (нейтрофильная) зернистость. Ядро разделено на 2-5 сегментов, соединенных между собой тонкими одноконтурными перемычками, окрашивается в фиолетовый цвет различной интенсивности. Иногда у абсолютно здоровых людей встречаются нейтрофилы, содержащие короткое палочковидное или двухсегментное интенсивно окрашенное ядро (рис. 33). Это так называемый пельгеровский вариант строения ядер гранулоцитов.
Эозинофил (рис. 32, Э) - клетка круглой формы. Характерным является ярко-розовая (эозинофильная) обильная крупная зернистость, обычно заполняющая всю цитоплазму. Ядро чаще двухсегментное и окрашивается в фиолетовый цвет различной интенсивности.
Базофил сегментоядерный - «тучная» клетка (рис. 32, Б) округлой формы. Цитоплазма окрашивается в розоватый с фиолетовым оттенком цвет и содержит крупную темно-фиолетовую (базофильную) неравномерную по форме и величине зернистость, нередко накладывающуюся на ядро. Ядро чаще бесструктурное, окрашено в темно-фиолетовый цвет и напоминает лист клена или трилистника; реже встречаются ядра с односторонним глубоким вдавлением, круглые и овальные.
Лимфоцит (рис. 32, JI) - клетка округлой формы. Ядро занимает большую часть клетки, оставляя лишь узкий ободок синеватой цитоплазмы в виде полумесяца. Оно круглое, иногда с небольшим вдавлением; окрашивается более интенсивно, чем ядра гранулоцитов; иногда в ядрах лимфоцитов различают ядрышки.
Лимфоциты отличаются от других клеток наличием перинуклеарной зоны, которая менее выражена у лимфоцитов большего размера. В цитоплазме некоторых лимфоцитов обнаруживаетя азурофильная (розовато-фиолетовая) зернистость.
Моноцит (рис. 32, Ион) - наиболее крупная клетка нормальной крови. Ядро различной формы (овальное, подковообразное, грибовидное), окрашивается слабее ядер описанных выше клеток. Соотношение между ядром и цитоплазмой приблизительно 1:1. Цитоплазма окрашивается в голубовато-серый цвет и обычно не содержит зернистости.
Подсчет лейкоцитарной формулы нормальной крови
Подсчет лейкоцитарной формулы проводят с помощью иммерсионной системы.
В связи с тем что в мазке крови различные виды лейкоцитов располагаются неравномерно (моноциты и нейтрофилы - преимущественно вдоль верхнего и нижнего продольного края мазка, а лимфоциты - ближе к центру мазка, подсчет лейкоцитарной формулы начинают у края мазка, вблизи образовавшейся щеточки, а затем постепенно продвигают препарат под объективом поперек мазка от одного края мазка к противоположному, подсчитывая все попадающиеся лейкоциты. Подсчет заканчивают, сосчитав 100 различных лейкоцитов в препарате. В другом препарате точно так же подсчитывают вторую сотню лейкоцитов.
Пользуясь счетной машинкой (рис. 34), получают общую сумму и количество каждого вида лейкоцитов в процентах. При отсутствии счетной клавишной машинки регистрацию лейкоцитов производят с помощью записи на листе бумаги. По вертикали записывают начальные буквы названий лейкоцитов, встречающихся в норме (ю., п., е., л., м., э., б.). По мере подсчета лейкоцитарной формулы каждый найденный лейкоцит регистрируют палочкой или точкой, которую ставят в горизонтальном ряду, соответствующем тому или другому виду лейкоцитов. Для облегчения последующего подсчета каждого вида лейкоцитов палочки или точки группируют десятками.
Процентное содержание отдельных видов лейкоцитов не отражает истинного количества в 1 мм3 крови, поэтому производят вычисление абсолютного их количества.
Для этого необходимо знать количество лейкоцитов в 1 мм3 крови и процентное содержание отдельных их видов, подсчитанных в окрашенном препарате. Абсолютное содержание отдельных видов лейкоцитов в 1 мм3 крови высчитывают, пользуясь следующей пропорцией:
а — 100% х — б,
где а - количество лейкоцитов, подсчитанных в камере Горяева; б - процентное содержание лейкоцитов, подсчитанных в мазке крови. Допустим, что количество лейкоцитов, подсчитанных в камере Горяева, составляет 8000 в 1 мм3, а количество моноцитов, подсчитанных в мазке
крови, - 4%. Исходя из пропорции, абсолютное количество моноцитов будет равно:
8000 - 100%
х - 4%
Итого, составляя дробь, получаем 320 экземпляров в 1 мм3 крови.
Практически абсолютное содержание отдельных видов лейкоцитов в 1 мм3 высчитывают путем умножения первых двух цифр лейкоцитов, подсчитанных в камере Горяева, на количество лейкоцитов в процентах, подсчитанных в мазке крови (при 10 000 лейкоцитов в 1 мм3 и более для расчета берут первые три цифры).
Пример. Количество лейкоцитов составляет 8000 в 1 мм3, количество моноцитов - 4 %.
80x4 = 320 экземпляров моноцитов в 1 мм3 крови. Для характеристики ядерного сдвига нейтрофилов высчитывают индекс сдвига. В норме индекс сдвига отношение количества палочкоядерных нейтрофилов к числу сегментоядерных: 0,05 - 0,08.
