Определение гемоглобина
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Гемометр Сали (ГС-3) с комплектом принадлежностей.
- Концентрированная соляная кислота.
- Дистиллированная вода.
- Набор для взятия крови из пальца.
Для определения количества гемоглобина используют гемометр ГС-3 (рис. 28), особенностью которого является наличие точных стандартов и пробирки со шкалой, градуированной в грамм-процентах (рис. 28).
Сущность метода
Гемоглобин крови под воздействием 0,1 N раствора соляной кислоты превращается в солянокислый гематин, интенсивность окраски которого сравнивают с цветом стандартов. Для определения гемоглобина необходим 0,1 N раствор соляной кислоты, который готовят следующим образом. В мерную колбу емкостью 1 л помещают 8,24 мл концентрированной соляной кислоты и доливают дистиллированной водой до метки; такой раствор можно также приготовить из фиксанала.
Техника определения гемоглобина
В градуированную пробирку до круговой метки (2 г%) наливают 0,1 N раствор соляной кислоты. Пробирку вставляют в гемометр. После нанесения укола в палец первую каплю крови удаляют ваткой или фильтровальной бумагой. В свежевыступнвшую каплю крови вносят кончик чистого сухого капилляра. Плавно, без перерывов, с помощью резиновой трубки с мундштуком насасывают кровь в капилляр до круговой метки 0,02 мл. Уровень крови в капилляре регулируют, прикасаясь к его кончику кусочками фильтровальной бумаги. Вытирают кончик капилляра от крови и вносят его в 0,1 N раствор соляной кислоты, находящийся в градуированной пробирке. Кровь выпускают в реактив тонкой струйкой, не взмучивая жидкости. Не вынимая капилляр из пробирки, его прополаскивают 2-3 раза надосадочным прозрачным 0,1 раствором соляной кислоты, затем извлекают из жидкости, прикасаясь его кончиком к стенкам пробирки, выдувают остаток жидкости и выносят из пробирки. Кровь с соляной кислотой немедленно смешивают, постукивая по дну пробирки. Пробирку ставят в прибор на 5 минут.
Вследствие гемолиза эритроцитов и образования солянокислого гематина жидкость буреет и становится прозрачной. Через 5 минут к испытуемой жидкости небольшими порциями прибавляют дистиллированную воду, каждый раз тщательно перемешивая жидкость с помощью стеклянной палочки. Стекающая с палочки жидкость должна полностью остаться в пробирке. В момент, когда цвет жидкости приблизится к цвету стандартов, воду начинают прибавлять осторожно, по каплям. Разведение заканчивают, как только цвет испытуемой жидкости совсем сравняется с цветом стандартов. Цвет жидкости и стандартов сравнивают при дневном освещении в проходящем свете, держа гемометр в вытянутой руке на уровне глаз. Определяют, на каком делении шкалы находится нижний мениск жидкости. Цена деления шкалы равна 0,2 г% (см. рис. 28).
Количество гемоглобина при оформлении в бланке анализа записывают в грамм-процентах и единицах. Грамм-проценты переводят в единицы, умножая их количество на 6, так как 1 г% соответствует 6 ед. (100: 16,67 = 6). В норме содержание гемоглобина от 11,7 г% (70 ед.) до 18 г% (108 ед.). После определения гемоглобина пробирку и капилляр промывают дистиллированной водой и высушивают, а гемометр укладывают в футляр.
