Определение глюкозы в моче

08.05.2016 3497 0.0 0

Оснащение рабочего места

Для определения глюкозы в моче рабочее место должно быть оснащено следующими элементами:

  1. Набор пипеток и пробирок.
  2. Воронки, колбы, фарфоровая ступка.
  3. Фильтровальная бумага.
  4. Спиртовка или газовая горелка.
  5. Сегнетовая соль.
  6. Сернокислая медь.
  7. Едкий натр.
  8. Лимоннокислый натрий.
  9. Углекислый натрий.
  10. Азотнокислый висмут.
  11. Дистиллированная вода.

Методики определения глюкозы в моче

В основу методик, используемых для качественного определения глюкозы в моче, положены ее восстанавливающие свойства.

Определение глюкозы в моче

В результате взаимодействия глюкозы с реактивом образуется окрашенное соединение, выпадающее в осадок. В реакциях Фелинга, Гайнеса-Акимова, Бенедикта сернокислая медь последовательно восстанавливается в закись меди - кирпично-красного цвета и в гидрат закиси меди - желтого цвета. В реакции Нилендера азотнокислый висмут восстанавливается в металлический висмут - черного цвета. Перед качественным определением глюкозы в моче выполняют следующую работу:
1. Мутную мочу фильтруют.
2. При большом содержании в моче белка (свыше 1%о) его удаляют. Для этого подкисляют мочу до слабокислой реакции, нагревают до кипения, затем охлаждают и фильтруют. Фильтрат должен быть прозрачным и при прибавлении к нему 20% раствора сульфосалициловой кислоты не давать помутнения.

Примечание. В редких случаях при наличии в моче большого количества восстанавливающих веществ (мочевая кислота, индикан, креатиннн, желчные пигменты и др.) их удаляют следующим образом. В пробирку наливают 8 мл мочи, прибавляют 1 мл 96° спирта и небольшое количество животного угля. Восстанавливающие вещества адсорбируются углем, оседающим на дно пробирки; глюкоза не адсорбируется, она остается в растворе.
При проведении качественного определения глюкозы с обработанной таким образом мочой в реакцию вступает только глюкоза.

Для качественного определения глюкозы в моче применяют следующие реакции:

  1. реакцию Фелинга;
  2. реакцию Гайнеса-Акимова (модифицированный капельный способ);
  3. реакцию Бенедикта;
  4. реакцию Нилендера;
  5. капельный способ качественного определения глюкозы в моче.

Рассмотрим данные реакции более подробно.

Реакция Фелинга

Для этой реакции готовят два реактива — № 1 и 2.

Реактив Фелинга № 1 (7% раствор сернокислой меди). 7 г сернокислой меди растворяют в дистиллированной воде, доводя объем растворителя до 100 мл. Реактив бледно-голубого цвета.

Реактив № 2. 8 г едкого натра и 35 г сегнетовой соли растворяют в воде, доведя объем растворителя до 100 мл. Реактив бесцветен.

Рабочий раствор реактива Фелинга готовят на 1-2 дня путем смешивания равных объемов реактива № 1 и 2.

Постановка реакции. 5-6 мл рабочего раствора реактива Фелинга помещают в химическую пробирку и смешивают с 5-6 мл профильтрованной мочи. Смесь приобретает синий цвет. Верхнюю часть пробирки с мочой нагревают над пламенем горелки и кипятят в течение 1-2 минут. При наличии глюкозы в нагретой части мочи образуется кирпично-красное окрашивание. При отсутствии глюкозы синий цвет не изменяется.

Реакция Гайнеса-Акимова (модифицированный капельный способ)

Для реакции готовят реактив Гайнеса (по прописи Акимова). Для этого 13,3 г химически чистой кристаллической сернокислой меди растворяют в 400 мл дистиллированной воды, в другой посуде растворяют 50 г едкого натра в 400 мл дистиллированной воды, в третьей — разводят 15 г глицерина в 200 мл дистиллированной воды. Смешивают первый и второй растворы и к этой смеси при постоянном помешивании прибавляют небольшими порциями третий реактив. Реактив Гайнеса синего цвета. Годен в течение длительного срока.

Постановка реакции. В пробирку помещают 8 капель реактива Гайнеса и 2 капли мочи. Пробирку нагревают над пламенем до закипания мочи или прогревают в кипящей водяной бане в течение 1-2 минут. При наличии глюкозы на дне пробирки образуется зеленоватый, коричнево-зеленоватый или красноватый осадок, а при ее отсутствии синий цвет реактива Гайнеса не изменяется.

Реакция Бенедикта

В реакции применяют реактив Бенедикта, который готовят следующим образом. В мерную колбу помещают 86,5 г лимоннокислого натрия и 100 г кристаллического углекислого натрия и растворяют при нагревании примерно в 350 мл дистиллированной воды. В другой посуде растворяют 8,65 г сернокислой меди в 50 мл дистиллированной воды. Оба раствора смешивают в мерной 500-миллилитровой колбе и доливают дистиллированной водой до метки. Реактив имеет синий цвет, достаточно стоек.

Постановка реакции. В пробирку наливают 5 мл реактива Бенедикта, прибавляют 8 капель мочи и кипятят над пламенем горелки 2 минуты или в кипящей бане 5 минут. При наличии глюкозы образуется зеленоватый желтый или красный осадок. При отсутствии глюкозы синий цвет реактива не изменяется. Пробу Бенедикта считают наиболее чувствительной и самой лучшей из проб, основанных на восстанавливающих свойствах глюкозы, ее отличает большая специфичность.

Реакция Нилендера

Для постановки реакции готовят реактив Нилендера. Для этого 2 г азотнокислого висмута и 4 г сегнетовой соли растирают в фарфоровои ступке, а затем растворяют в 1 мл 10% раствора едкого натра, который приливают небольшими порциями в ступку.

После этого реактив фильтруют в склянку из темного стекла и хранят на холоде, так как он нестоек. Годность реактива периодически проверяют. С этой целью 3 мл реактива разводят в 10 мл дистиллированной воды и 4 мл разведенного реактива нагревают в пробирке до кипения. Если жидкость не буреет, значит реактив годен для употребления.

Постановка реакции. В пробирку помещают 6 мл мочи, предварительно освобожденной от белка, прибавляют 3 мл реактива и перемешивают. Затем верхнюю часть пробирки нагревают и кипятят в течение 2-3 минут, пробе дают постоять в штативе в течение 10 минут, после чего учитывают результаты. При наличии глюкозы в моче образуется темно-бурый или черный осадок, а при ее отсутствии цвет смеси не изменяется.

Капельный способ качественного определения глюкозы в моче

В последнее время нашел применение сухой способ определения глюкозы в моче. Для этой реакции готовят следующий реактив: 1 г мелкорастертого медного купороса и 10 г углекислого натрия тщательно перемешивают и хранят в темной склянке с притертой пробкой при комнатной температуре. Щепотку порошкообразного реактива помещают на предметное стекло и пипеткой добавляют 2-3 капли исследуемой мочи. Затем смесь подогревают над пламенем горелки до закипания. Голубой цвет указывает на отсутствие глюкозы, зеленый — на содержание глюкозы около 0,1 %, желто-зеленый — на присутствие около 0,5 % глюкозы, желтый — около 1 %, коричневый — около 2% и кирпично-красный — около 3-4% глюкозы и более.
В последнем случае анализ мочи на глюкозу повторяют после разведения мочи в 2 раза.

Содержание глюкозы в моче можно установить с помощью индикаторной бумаги «глюкофан». В специальной инструкции, прилагаемой к каждой партии бумаги, подробно изложена техника определения. Кроме того, в настоящее время применяют индикаторную бумагу отечественного производства «глюкотест».


Читайте также:
Комментарии
Имя *:
Email *:
Код *: