Определение кровяного пигмента в моче

08.05.2016 3201 0.0 0

Оснащение рабочего места

При данном виде анализа мочи рабочее место должно быть оснащено следующими элементами:

  1. Пробирки.
  2. Пипетки.
  3. Капельницы.
  4. Гваяковая смола.
  5. Бензидин.
  6. Пирамидон.
  7. Ледяная уксусная кислота.
  8. Эфир.
  9. 96° спирт.
  10. Пергидроль.

Методика определения кровяного пигмента в моче

Данная методика основана  на следующем принципе: гемоглобин обладает свойством отнимать кислород от пероксидных соединений и отдавать его другим веществам (гваяковой смоле, бензидину, пирамидону); в результате этого образуются красящие вещества. Так, при реакции с бензидином получают зеленое или синее окрашивание, с гваяковой смолой — синее, с пирамидоном — фиолетовое.

Определение кровяного пигмента в моче

При определении кровяного пигмента в моче придерживаются следующих правил:

1. Исследование производят в свежеполученной и хорошо взболтанной моче, в абсолютно чистой посуде. В постоявшей моче гемоглобин превращается в метгемоглобин, не обладающий пероксидазными свойствами, что может послужить причиной отрицательных результатов исследования.

2. Для реакции используют химически чистые и не вышедшие из срока годности реактивы.

3. Концентрируют гемоглобин и освобождают мочу от некоторых сопутствующих веществ (миогемоглобин, хром, медь, йодистый калий, бромистый калий и др.), дающих аналогичный результат реакции. Для этого готовят уксусно-эфирную вытяжку. С этой целью в химическую пробирку наливают 8-10 мл хорошо взболтанной нефильтрованной мочи (если не соблюдать этих указаний, то можно получить отрицательные результаты), 2 мл ледяной уксусной кислоты и 4-5 мл эфира; содержимое пробирки встряхивают и оставляют в штативе на несколько минут для отделения уксусно-эфирной вытяжки, в которую переходит гемоглобин в виде гематина. Верхний слой (уксусно-эфирная вытяжка) используют для проведения реакции.

4. Готовят 3% раствор перекиси водорода из свежего пергидроля : к 3 частям пергидроля прибавляют 27 частей дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

Кровяной пигмент выявляют следующими реакциями:

  1. реакцией с гваяковой смолой;
  2. реакцией с бензидином;
  3. реакцией с пирамидоном.

Рассмотрим данные виды реакций более подробно

Реакция с гваяковой смолой

Для постановки этой реакции применяют свежеприготовленный насыщенный раствор гваяковой смолы. В пробирку помещают щепотку (на кончике ножа) гваяковой смолы и приливают 2-4 мл 96° спирта, растворяют до цвета крепкого чая. В реакции используют раствор без осадка.

Постановка реакции. В отдельную пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки и прибавляют 8-10 капель свежеприготовленного насыщенного спиртового раствора гваяковой смолы и 8-10 капель 3% перекиси водорода.

При наличии кровяного пигмента образуется синее окрашивание. При незначительном содержании кровяного пигмента соответствующее окрашивание может появиться не сразу, а через несколько минут после начала реакции.

Реакция с бензидином

Для постановки реакции применяют 5% раствор бензидина в ледяной уксусной кислоте. Реактив готовят следующим образом: 0,5 г химически чистого беизидииа помещают в цилиндр и доливают до 10 мл ледяной ускусной кислотой. Приготовленный реактив должен быть бесцветным.

Постановка реакции. В пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки, после чего прибавляют 8-10 капель 5% раствора бензидина и 8-10 капель 3% перекиси водорода.
При наличии кровяного пигмента образуется зеленое окрашивание.

Реакция с пирамидоном

Для реакции в качестве реактива применяют 5% раствор пирамидона: 0,5 г пирамидона помещают в цилиндр и доливают до 10 мл 96° спиртом.

Постановка реакции. В пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки, прибавляют 8-10 капель 5% спиртового раствора пирамидона и 8-10 капель 3% перекиси водорода.
При наличии кровяного пигмента образуется фиолетовое окрашивание.

В случае выявления кровяного пигмента в бланке анализа указывают: «кровяной пигмент обнаружен».


Читайте также:
Комментарии
Имя *:
Email *:
Код *: