Определение глюкозы в моче поляриметрическим методом

Оснащение рабочего места

Для определения глюкозы в моче поляриметрическим методом рабочее место должно быть оснащено следующими элементами:

1. Пробирки.
2. Пипетки.
3. Штатив для пробирок.
4. Фильтровальная бумага.
5. Воронки.
6. Газовая (спиртовая) горелка.
7. Поляриметр.
8. Сахариметр Альтгаузена.
9. Уксуснокислый свинец.
10. Едкий натр.
11. Ледяная уксусная кислота.
12. Нитропруссид натрия.
13. Аммиак.

При определении глюкозы в суточном количестве мочи у больных диабетом необходимо исследовать три порции мочи, собранные через каждые 8 часов. С целью определения количества глюкозы в моче используют поляриметрический метод и способ А. Я. Альтгаузена.

Методика количественного определения глюкозы в моче поляриметрическим методом

Поляриметрический метод количественного определения глюкозы основан на свойстве глюкозы как оптически активного вещества смещать поляризованный луч от первоначального направления: угол отклонения поляризованного луча прямо пропорционален количеству глюкозы в процентах. Поэтому количество глюкозы определяют по углу отклонения поляризованного луча, устанавливаемого с помощью специального прибора — поляриметра (рис. 1).

Техника определения. При определении глюкозы в моче с помощью поляриметра выполняют следующие указания:

1. Моча должна быть слабокислой реакции.
2. Мочу слабокислой реакции (в щелочной среде уксуснокислый свинец осаждает гексозы) обесцвечивают и освобождают от мути, добавляя в нее уксуснокислый свинец (в сухом виде) до концентрации 4% (из расчета 4 г уксуснокислого свинца на 100 мл мочи).
3. После добавления уксуснокислого свинца мочу тщательно фильтруют до получения прозрачного фильтрата. Если требуется повторное фильтрование, то его производят через один и тот же фильтр, так как уксуснокислый свинец постепенно закрывает поры фильтра, что способствует получению прозрачного фильтрата.
4. При наличии в исследуемой моче белка более одного процента его удаляют, так
   как белок, являясь оптически активным веществом, отклоняет поляризованный луч от первоначального направления и этим мешает определению глюкозы в моче.
5. Проверяют оптическую систему поляриметра и, если нужно, очищают ее ваткой, смоченной в эфире.
6. Для работы используют чистую сухую кювету. Кювета представляет собой керамическую полую трубку с винтовой нарезкой на концах. Отверстия кюветы закрывают при помощи защитных стекол и завинчивающихся колпачков.

Рис. 1. Портативный поляриметр. 1 — зеркало; 2 — основная часть поляриметра; 2а — стойка поляриметра; 3 — поляризатор; 4 — кювета; 5 — анализатор; 6 — диск анализатора; 7 — окуляр поля зрения; 8 — окуляр шкалы; 9 — шкала.

Устанавливают поляриметр в исходном положении (см. рис. 1). С этой целью на подставку прибора (рис. 1, 2а) навинчивают основную часть поляриметра (рис. 1, 2). Поляриметр помещают перед источником света. Поворотом осветительного зеркальца (рис. 1, 1) под контролем глаза направляют в прибор световой луч, добиваясь наилучшего освещения поля зрения, которое окрашено с помощью светофильтра в ораyжевый цвет. Установку ведут при постоянном наблюдении в окуляр.
С помощью фокусирующих устройств, расположенных на окуляре и шкале (рис. 1, 7-8), добиваются отчетливого изображения всех частей поля зрения и шкалы.

Шкала поляриметра состоит из основной шкалы и нониуса. Основная шкала разделена на 10° влево и вправо от нуля, цена каждого деления этой шкалы 1° (1%). Нониус (дополнительная шкала) разделен на 10 делений, цена каждого деления (0,1%).

В открытую часть поляриметра помещают чистую, сухую кювету (рис. 1, 4). Диск анализатора (рис. 1, 6) медленно поворачивают вправо или влево до получения одинаковой освещенности всех трех частей поля зрения. В этот момент на шкале фиксируют нулевую установку поляриметра. На шкале это может выглядеть так: а) нуль нониуса совпадает с нулем основной шкалы; б) нуль нониуса несколько смещен влево от нуля основной шкалы; в) нуль нониуса несколько смещен вправо от нуля основной шкалы.

Нулевую установку записывают и используют при расчете результатов определения. Если нулевая установка расположена влево от нуля основной шкалы, ее показатель суммируют с результатами определения, если же нулевая установка расположена вправо от пуля основной шкалы, ее показатель вычитают из результатов определения.

Пустую кювету извлекают из открытой части поляриметра так, чтобы не нарушить нулевую установку. Свинчивают с одного конца кюветы колпачок со стеклышком. Подготовленную мочу наливают в кювету по стенке, чтобы не образовалась пена. Пипеткой доливают мочу так, чтобы она выступала куполообразно над краем кюветы. Затем на отверстие кюветы надвигают стеклышко, как бы срезая им выступающую часть мочи, после чего колпачок завинчивают. При правильном заполнении кюветы пузырьков воздуха не образуется. Кювету с мочой помещают в открытую часть поляриметра и через 5 минут приступают к определению (за это время прекращается колебание жидкости, затрудняющее исследование). В окуляр рассматривают поле зрения поляриметра, при этом центральная часть поля зрения затемняется. Это свидетельствует о том, что поляризованный луч отклонен от первоначального направления глюкозы, содержащейся в исследуемой моче.

Продолжая наблюдение в окуляр, медленно вращают диск анализатора вправо до тех пор, пока не восстановится равномерная освещенность всех трех частей поля зрения. По шкале отмечают, на сколько делений вправо от нулевой установки поляриметра переместился нуль нониуса.
Отсчет показателей производят по шкале.

Для четкости изображения шкала и поле зрения снабжены шестикратной лупой и фокусирующим устройством (рис. 1, 7-9). С помощью нуля нониуса отсчитывают целое число градусов (%). Для отсчета десятых долей градуса (%) используют 10 мелких делений нониуса. С этой целью отыскивают одно из мелких делений нониуса считая от нуля, которое точно совпадает с одним из делений основной шкалы. Например, нуль нониуса расположен между первым и вторым делением основной шкалы, а шестое деление нониуса совпадает с делением основной шкалы. В данном примере шкала поляриметра показывает 1,6° (%).

В связи с тем что портативный поляриметр имеет трубку кюветы длиной 9,47 см, т. е. в 2 раза короче трубки обычного поляриметра, показатели шкалы умножают на 2. При нулевой установке поляриметра вправо или влево от нуля основной шкалы ее показатель вычитают или приплюсовывают.

Определение производят 3-4 раза, высчитывают среднее арифметическое. Образующийся в кювете под влиянием уксуснокислого свинца налет растворяют уксусной кислотой, после чего кювету тщательно моют дистиллированной водой и высушивают. По окончании работы все части поляриметра вытирают мягкой тряпочкой и укладывают в футляр.