Исследование тканевой жидкости при сифилисе
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Предметные стекла.
- Покровные стекла.
- Микроскоп.
- Черная бумага.
- Ножницы.
- Осветитель к микроскопу.
- Демонстрационные препараты с бледными спирохетами, окрашенными по методу Романовского и по методу Бурри.
- Иммерсионное масло.
- Дистиллированная вода.
- Параболоид-конденсор для темного поля зрения.
Материалом для исследования служит тканевая жидкость из сифилитических элементов, а также пунктат, получаемый из лимфатических узлов. Работая с этим материалом ввиду опасности заражения надевают резиновые перчатки, для неотложной дезинфекции готовят 1: 1000 раствор сулемы (HgCb) или 1% раствор карболовой кислоты.
Техника приготовления препаратов и изучение их в темном поле зрения
На чистое предметное стекло наносят каплю физиологического раствора, прибавляют к ней каплю тканевой жидкости, накрывают покровным стеклом (во избежание образования пузырьков воздуха покровное стекло опускают на материал наклонно) и исследуют в темном поле зрения. Для исследования готовят два-три препарата. Принцип исследования препарата в темном ноле зрения основан на свойстве падающих сбоку световых лучей отклоняться плотными частицами (в частности, микробами), благодаря чему последние представляются глазу наблюдателя ярко светящимися.
Темное поле зрения можно получить, заменив обычный конденсор специальным — параболоид-конденсором. При отсутствии параболоид-конденсора пользуются методом Архангельского.
Монтаж темного поля зрения по Архангельскому
Из оправы путем ослабления крепящего винта извлекают конденсор, с которого свинчивают верхнюю линзу. Из черной бумаги вырезают кружок с четырьмя выступами (рис. 72) размером с 15-копеечную монету. Бумажку укладывают на нижнюю линзу конденсора так, чтобы выступы упирались в оправу конденсора. После этого навинчивают верхнюю линзу. Конденсор вставляют в оправу микроскопа, крепят винтом и поднимают вверх до упора.
Рисунок 72. Форма бумажки по Архангельскому. 1 - бледная спирохета в темном поле (2).
Техника исследования препарата состоит в следующем. На верхнюю линзу конденсора наносят каплю воды или кедрового масла и приготовленный препарат кладут на эту каплю.
Препарат рассматривают при большом увеличении, пользуясь мощным источником света (дуговая лампа, обычная лампа в 200-300 свечей или осветитель для микроскопа).
Для создания темного поля зрения может быть использован метод О. Е. Кашириной. Накладывают или наклеивают на матовое стекло светофильтра к микроскопу кружок черной бумаги так, чтобы между бумагой и оправой, в которую вставляют светофильтр, оставалось свободное пространство, равное 3-4 мм. Далее поступают так, как описано выше.
В темном поле зрения бледные спирохеты имеют вид подвижных серебристых спиралей или пунктира в связи с более ярким освещением выпуклой части завитков. Завитки равномерные и количество их колеблется от 8 до 14.
Для бледных спирохет характерно поступательное движение, движение вокруг своей оси и маятникообразное. Spirocliaeta relringeus , довольно часто встречающаяся в выделениях из язв, имеет не более шести завитков, она более грубая, обладает резкими движениями.
Приготовление окрашенных препаратов для обнаружения бледной спирохеты
С целью окраски бледной спирохеты можно использовать метод Романовского и метод Бурри.
1. Метод Романовского
Каплю тканевой жидкости распределяют на предметном стекле так же, как это рекомендуется для крови. Приготовленный мазок подсушивают в течение 1-1.5 часа на воздухе, а затем фиксируют метиловым спиртом в течение 3-4 минут.
Поскольку бледная спирохета плохо воспринимает анилиновые краски, препарат окрашивают разведенной по титру краской Романовского в течение 14-15 часов. Затем его осторожно ополаскивают водой, высушивают и изучают с иммерсией.
В препаратах, окрашенных по методу Романовского, бледная спирохета окрашивается в розовый цвет, а другие спирохеты — в синий (рис. 73).
Рисунок 73. Спирохеты сифилиса. Окраска по Романовскому.
2. Метод Бурри
На край тонкого предметного стекла наносят 1-2 капли туши и такое же количество тканевой жидкости, ребром шлифованного стекла их осторожно смешивают и размазывают вдоль предметного стекла. Препарат сушат на воздухе (он должен пропускать свет) и просматривают под микроскопом с иммерсионной системой.
На темно-сером фоне препарата хорошо видны бледные спирохеты.
