Антенатальная диагностика резус-принадлежности плода

Д. В. Умбрумянц и Ю. Д. Валика в 1969 г. предложили выявлять резус-антиген в крови резусотрицательных беременных. В случае нахождения резус-антигена можно предположить наличие резусположительного плода, а при его отсутствии — резусотрицательного. Для определения резус-антигена плода использован принцип прямой и непрямой пробы Кумбса. В отличие от классической непрямой пробы Кумбса, когда исследуется сыворотка беременных, и прямой пробы Кумбса, предусматривающей реакцию с эритроцитами новорожденных, реакция ставится только с эритроцитами беременной. Учитывая, что число эритроцитов плода в кровяном русле матери относительно невелико, в реакции используется 30% взвесь эритроцитов беременной. Для исследования лучше всего использовать венозную кровь в количестве 2-3 мл, взятую для определения резус-антител.

Постановка прямой реакции

Эритроциты резусотрицательной беременной трижды отмывают физиологическим раствором и готовят из них 30% взвесь в физиологическом растворе. На тарелку наносят 2 капли антиглобулиновой сыворотки и 1-2 капли 30% взвеси исследуемых эритроцитов. Результат проведенной реакции читают через 10 мин под микроскопом, перенеся каплю приготовленной смеси на предметное стекло. Наличие единичных агглютинатов среди эритроцитов матери (смешанное поле) позволяет предположить наличие резусположительного плода.

Постановка непрямой реакции

Каплю эритроцитов беременной, тщательно отмытых физиологическим раствором, помещают в пробирку и смешивают с каплей стандартной сыворотки антирезус. Пробирку помещают в термостат на 60 мин при температуре 37°. Параллельно необходимо ставить контрольное исследование с эритроцитами резусположительного и резусотрицательного доноров. После инкубации эритроциты из пробирок трижды отмывают физиологическим раствором и готовят из них 30% взвесь в физиологическом растворе. На тарелку наносят по 2 капли преципитирующей сыворотки для исследуемых эритроцитов и контроля. Преципитирующую сыворотку смешивают с 1-2 каплями 30% взвеси эритроцитов беременной, обработанных эритроцитами. Реакцию читают спустя 10 мин под микроскопом. Отсутствие гемагглютинатов в контрольном исследовании и наличие их среди эритроцитов матери позволяют допустить, что у данной беременной кровь плода имеет резусположительную принадлежность. Во избежание ошибок перед микроскопией к эритроцитам, смешанным с антнглобулиновой сывороткой, необходимо добавить 1-2 капли физиологического раствора, что способствует исчезновению ложных агглютинатов. При микроскопии препарата необходимо под контролем зрения нажать на покровное стекло стеклянной палочкой. При этом ложные агглюгинаты распадаются.

Учет реакции

1. Отсутствие агглютинации обозначают знаком «минус» (—).
2. Мелкие агглютинаты, состоящие из 3-4 эритроцитов, всегда настораживают в отношении неспецифической реакции. Реакцию оценивают как сомнительную и обозначают знаком ±.
3. Наличие нескольких агглютинатов, образуемых из 5-10 эритроцитов, расценивается как слабоположительная реакция ( + ).
4. Нахождение агглютинатов, содержащих более 10 эритроцитов, рассматривают как положительную реакцию ( ++ ).
5. Нахождение в препарате многочисленных крупных агглютинатов обозначают знаком + + +.
6. Агглютинацию, видимую невооруженным глазом, расценивают как резко положительную (+ + + + ).

Точность метода

Определение резус-принадлежности плода можно проводить начиная с 16-й недели беременности. Однако большей точностью метод обладает при его использовании после 30 нед беременности. При обследовании беременных с наличием или отсутствием резус-сенсибилизации правильные результаты получают до 40% при прямой реакции и до 85% при непрямой. Таким образом, прямой реакцией следует пользоваться как грубо ориентировочной. Определение резус-принадлежности должно вестись главным образом непрямой реакцией.