Исследование толстой капли крови
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Демонстрационные препараты.
- Микроскоп.
- Иммерсионное масло.
Изучение плазмодиев - возбудителей трехдневной, четырехдневной и тропической малярии
С целью обнаружения плазмодиев малярии толстую каплю и мазки изучают с иммерсионной системой микроскопа. Малярийные плазмодии отыскивают в более тонкой части капли (по краю ее), где лучше сохраняется форма паразитов.
В сомнительных случаях изучение малярийных плазмодиев проводят в мазках крови. Паразиты, как правило, обнаруживаются в эритроцитах; их цитоплазма окрашивается в серовато-синий или голубой цвет, а ядро — в оттенки красного цвета.
Возбудитель трехдневной малярии - Plasmodium vivax (рис. 46а, 1 и 46б, 1). Мерозоит имеет овальную или круглую форму, размер его 1-2 ц. Он представляет собой ядро и комочек цитоплазмы.
Рис. 46а. Возбудители малярии человека в мазке крови. 1 - Plasmodium vivax, 2 - Plasmodium malarie, 3 - Plasmodium falciparum
Кольцевидный шизонт по виду напоминает перстень. Он имеет в центре вакуоль, окруженную ободком цитоплазмы, в наиболее тонком месте которой расположено маленькое ядро. Различают мелкие, средние и крупные кольцевидные шизонты.
Амебовидный шизонт имеет одно ядро и цитоплазму, окружающую в молодых шизонтах одну, а во взрослых несколько вакуолей. Имеющиеся в питоплазме паразита ложноножки придают ему причудливую форму. На полюсе, противоположном ядру, цитоплазма шизонта значительно шире и содержит коричневые зернышки пигмента. В участках эритроцитов, свободных от плазмодиев, выявляют обильную, мелкую красноватую зернистость Шюффнера.
Шизонт, подготавливающийся к делению, теряет вакуоли, принимает округлую форму с правильными ровными контурами, пигмент располагается диффузно, либо собирается в кучки, а ядро — ближе к периферии цитоплазмы паразита. Шизонт заполняет почти весь эритроцит, который увеличивается в размере. В свободном от паразита пространстве выявляется зернистость Шюффнера. В делящемся шизонте выявляют два и более ядер в необособленной цитоплазме.
Морула имеет от 14 до 22 мерозоитов, тесно прилегающих друг к другу, пигмент в ней собирается в одну кучку, реже — в две или остается рассеянным.
Женские гаметоциты (макрогаметоциты) крупнее мужских, имеют маленькое плотное ядро, располагающееся эксцентрично. Цитоплазма темно-голубого цвета, в которой равномерно рассеян обильный пигмент темно-коричневого цвета. Мужские гаметоциты (микрогаметоциты) имеют более крупное и рыхлое ядро, располагающееся центрально, в периферических участках цитоплазмы обнаруживается обильный пигмент коричневатого цвета. В свободных от паразита участках эритроцита выявляется зернистость Шюффнера.
Возбудитель четырехдневной малярии — Plasmodium malariae (рис. 46а, 2 и 46б, 2). Имеет те же формы развития, что и возбудитель трехдневной малярии. Встречаются как амебовидные, так и лентовидные формы шизонтов. Молодые формы лентовидных шпзонтов расположены поперек эритроцита в виде узкой полоски. Взрослые лентовидные шизонты находятся в виде ленты, ядро вытянуто в длину и расположено по краю ленты, шизонты занимают почти весь эритроцит. Пигмент сосредоточен на противоположной от ядра стороне.
Морула имеет 6-12 (чаше 8) мерозоитов; располагаются они в виде правильной розетки («маргаритки») вокруг кучки пигмента.
Рис. 46б. Возбудители малярии человека в толстой капле. 1 - Plasmodium vivax, 2 - Plasmodium malarie, 3 - Plasmodium falciparum
Половые формы развития (гаметоциты) округлые; они мельче гаметоцитов возбудителя трехдневной малярии. Возбудитель четырехдневной малярии имеет следую¬щие морфологические особенности: он меньше Plasmodium vivax; эритроциты с находящимися в них паразитами никогда не увеличиваются в размерах.
Возбудитель тропической малярии — Plasmodium рга-ecox falciparum (рис. 46а, 3 и 466, 3). Кольцевидные шизонты мелкие и имеют вид тонких ободков; они занимают 1/6 часть эритроцита.
Амебовидные шизонты имеют одну-две широкие ложноножки, пигмент располагается в одном месте в виде компактной кучки темно-коричневого цвета. Гаметоциты имеют характерную форму полулуния.
В середине возбудителя располагается ядро. Женские гаметоциты имеют компактное ядро, окруженное пигментом в виде зерен; цитоплазма окрашивается по Романовскому в синий цвет. У мужских гаметоцитов ядро более крупное и рыхлое, цитоплазма светло-голубого цвета, иногда виден ободок эритроцита. В крови больного обнаруживают кольца и гаметоциты раздельно или вместе. Эритроциты с находящимися в них плазмодиями не увеличены.
Обнаружение спирохет возвратного тифа в мазках крови и толстой капле
С целью обнаружения спирохет возвратного тифа препараты крови окрашивают по Романовскому или разведенным (1:4, 1:5) фуксином Циля. Чтобы окрасить мазки фуксином Циля, их фиксируют, наливают на 1-2 минуты разведенный фуксин Циля, сливают краску и смывают водой. Мазок высушивают и исследуют под микроскопом с иммерсией.
Спирохеты возвратного тифа (рис. 47) представляют собой штопорообразно извитые тонкие нити. По Романовскому окрашиваются в фиолетовый цвет, разведенным фуксином — в красный.
Рис. 47. Спирохета возвратного тифа в крови
Определение степени полихромазии в толстой капле
Степень полихромазии устанавливают в толстой капле, окрашенной по Романовскому. Препараты изучают с иммерсионной системой микроскопа. В нескольких полях зрения подсчитывают количество синевато-фполетовых сеточек (рис. 48). По количеству сеточек, содержащихся в каждом поле зрения, судят о степени полихромазии. Если при нормальном количестве эритроцитов в 1 мм3 крови насчитывают до 10 сеточек в поле зрения, то полихромазию обозначают одним полюсом (Р + ), при обнаружении до 20 сеточек ее обозначают двумя полюсами (Р++), при количестве сеточек до 30 — тремя полюсами (Р+ + +) и в случае большого количества сеточек — четырьмя плюсами (Р + + + +).
Рис. 48. Полихроматофилия и базофильная зернистость в толстой капле. а - сеточка остатки полихроматофилии эритроцитов
