Функциональные пробы печени

18.01.2018 46 0.0 0

Постановка сулемово-фуксиновой пробы (реакция Таката-Ара)

Оснащение рабочего места

  1. Штативы.
  2. Градуированные пипетки на 1, 2 и 5 мл.
  3. Капельницы.
  4. Пробирки.
  5. Бюретка.
  6. Основной фуксин.
  7. Сулема (HgCl2).
  8. Поваренная соль.
  9. Углекислый натрий.
  10. Дистиллированная вода.

Для исследования необходима сыворотка крови.

Сущность пробы

Коллоидная окись ртути (HgO) нарушает коллоидную устойчивость сыворотки крови и вызывает коагуляцию (свертывание) белков. Это составляет сущность реакции.

Для данной пробы используют следующие реактивы:

  1. Физиологический раствор поваренной соли.
  2. 10% раствор углекислого натрия. Раствор готовят из предварительно прокаленного и охлажденного углекислого натрия: 10 г безводного углекислого натрия растворяют в небольшом количестве воды в 100-миллплитровой колбочке и доводят водой до метки.
  3. 0,5% раствор сулемы: 0,5 г химически чистой сулемы растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды в колбе на 100 мл при нагревании, затем охлаждают и доливают водой до метки.
  4. 0,02% раствор фуксина: 0,02 г основного фуксина растворяют дистиллированной водой в мерной колбе на 100 мл.
  5. Смесь 0,5% раствора сулемы и 0,02% раствора фуксина. Готовят смешением двух названных реактивов в равных объемах непосредственно перед исследованием.

Техника определения

В штатив помещают четыре небольшие пробирки, нумеруют их и в первую наливают 3,5 мл, а в три остальные по 1 мл физиологического раствора. В первую пробирку добавляют 0,5 мл негемолизированной сыворотки и смешивают, после чего из первой пробирки во вторую, из второй в третью, из третьей в четвертую переводят по 1 мл смеси. Из четвертой пробирки выливают 1 мл смеси. Во все четыре пробирки добавляют по одной капле раствора углекислого натрия и взбалтывают.

В отдельной пробирке смешивают взятые в равном объеме 0,5% раствор сулемы и 0,02% раствор основного фуксина и в каждую из четырех опытных пробирок наливают по 0,3 мл приготовленного реактива. Пробирки встряхивают и наблюдают за выпадением осадка, который является показателем положительной реакции.

Учет реакции

Если осадок выпадает сразу, то реакция считается резко положительной ( + + + ), если через 2 часа — положительной ( + + ), если же осадок выпадает в течение 24 часов — слабо положительной (+).

Примечание. Положительной реакция считается в том случае, если осадок образуется в трех последовательных пробирках. Помутнение раствора в расчет не принимается. Отсутствие осадка в пробирках свидетельствует об отрицательной реакции. Постановку реакции Таката — Ара следует проводить при температуре 16-20°.

Постановка сулемовой пробы Гринстеда

Сущность метода такая же, как и реакции Таката—Ара. Для данной пробы используют следующие реактивы:

  1. 0,1% водный раствор сулемы.
  2. 0,9% раствор поваренной соли.

Техника определения

В бюретку с делениями по 0,01 мл наливают 0,1% раствор сулемы. В пробирку диаметром приблизительно около 15 мм наливают 0,5 мл свежей исследуемой сыворотки, добавляют 1 мл 0,9 % раствора NaCl и титруют содержимое пробирки 0,1% раствором сулемы по каплям на черном фоне до появления стойкого помутнения. При положительной реакции стойкое помутнение появляется внезапно.

Количество 0,1% раствора сулемы, пошедшей на титрование, учитывают в миллилитрах. В норме на титрование расходуется от 1,5 до 2,2 мл 0,1% раствора сулемы.

Постановка коагуляционной пробы Вельтмана

Оснащение рабочего места

  1. Штативы.
  2. Градуированные пипетки на 1, 2 и 5 мл.
  3. Пробирки.
  4. Водяная баня.
  5. Колбочки на 100 мл.
  6. Хлористый кальций.

Для исследования необходима сыворотка крови.

Сущность пробы

В основу метода положено изменение коллоидной стабильности белков сыворотки под влиянием различных концентраций хлористого кальция при температуре кипения.

Для этой пробы необходимы следующие реактивы.

  1. 10% раствор СаСЬ: взвешивают 10 г хлористого кальция безводного или 19,8 г кристаллического хлористого кальция и растворяют в 10 мл дистиллированной воды.
  2. 0,1% раствор СаС12: 1 мл 10% раствора СаС12 наливают в мерную колбу на 100 мл и доливают водой до метки.

Техника исследования

В штатив устанавливают 11 пробирок, нумеруют их, наливают реактивы по следующей схеме: и получают следующее содержание хлористого кальция в процентах:

Таблица для определения хлористого кальция

Пипетка не должна касаться реактива, находящегося в пробирке.

Перемешав содержимое пробирок путем вращения их между ладонями (при этом не следует допускать появления пены), штатив с пробирками помещают точно на 15 минут в кипящую водяную баню. Через 15 минут штатив с пробирками вынимают и тотчас же учитывают результат. Положительной реакция считается при выпадении хлопьев с просветлением жидкости над ними. Помутнение в расчет не принимают (рис. 91).

Проба Вельтмана

Рисунок 91. Проба Вельтмана. Тип реакции: нормальный (а), удлиненный (б), укороченнный (в).

Учет реакции производится по числу пробирок с положительной реакцией, которые образуют зону хлопьеобразования - «коагуляционную ленту». В норме выпадение хлопьев (коагуляцию) отмечают в первых шести пробирках. Если хлопья выпадают до шестой пробирки, реакцию считают укороченной (сдвиг влево), при наличии коагуляции в седьмой, восьмой и т. д. пробирках — удлиненной (сдвиг вправо) (см. рис. 91).


Читайте также:
Комментарии
avatar