Определение кетоновых тел в моче
Качественные реакции на кетоновые тела основаны на свойстве последних в щелочной среде давать соединение с нитропруссидом натрия, имеющее красную или фиолетовую окраску. При этом надо учитывать, что некоторые нормальные составные части мочи, в частности креатинин, также реагируют с нитропруссидом натрия; чтобы отличить кетоновую окраску от окраски, которую дает креатинин, используют химически чистую ледяную уксусную кислоту. Уксусная кислота разрушает окраску, связанную с креатинином, при этом сохраняет и даже усиливает окраску, обусловленную кетоновыми телами.
Кетоновые тела (ацетон, оксимасляная и ацетоуксусная кислота) определяют, как правило, в тех порциях мочи, в которых была обнаружена глюкоза. В более редких случаях определение кетоновых тел производят по специальному требованию врача.
Кетоновые тела определяют реакцией Легаля или реакцией Ланге. Для этих реакций необходим свежеприготовленный насыщенный раствор нитропруссида натрия: к щепотке реактива (кристаллы рубиново-красного цвета) приливают 3-4 мл воды и взбалтывают смесь до получения розовато-красного окрашивания жидкости; при этом на дне пробирки должна остаться часть кристаллов реактива.
Реакция Легаля
К 4-6 мл мочи прибавляют несколько капель свежеприготовленного насыщенного раствора нитропруссида натрия и несколько капель 10% водного раствора едкого натра. Получают рубиново-красное окрашивание. Эта окраска возникает всегда в любой моче от присутствия креатинина. Затем прибавляют 8-10 капель ледяной уксусной кислоты (до резко кислой реакции).
При наличии кетоновых тел рубиново-красный цвет исчезает и появляется пурпурно-красный или фиолетово- красный (малиновый). При исчезновении красного цвета смеси и переходе его в зеленовато-желтый цвет реакцию считают отрицательной (рис. 4).
Реакция Ланге
К 4-6 мл мочи прибавляют 8-10 капель ледяной уксусной кислоты и несколько капель свежеприготовленного насыщенного раствора нитропруссида натрия. На смесь с помощью пипетки осторожно наслаивают 1-2 мл аммиака. Пробу считают положительной, если в течение 3 минут на границе между аммиаком и остальным содержимым пробирки образуется фиолетово-красное кольцо (см. рис. 4). В бланке анализа мочи обычно отмечают: «кетоновые тела обнаружены» или «кетоновые тела не обнаружены».
Проба Лестраде
В последнее время находит применение экспресс-метод определения кетоновых тел в моче — проба Лестраде, реактив для которой готовят так: 1 г нитропруссида натрия, 20 г сернокислого аммония и 20 г безводного карбоната натрия помещают в ступку и тщательно растирают до получения мелкого однородного порошка. Реактив стоек. Его хранят в тщательно закрытой стеклянной банке.
Постановка реакции. На предметное стекло, помещенное на белый лист бумаги, наносят щепотку реактива Лестраде, к которому добавляют 2-3 капли исследуемой мочи. При наличии кетоновых тел наиболее интенсивное вишневое окрашивание наступает в течение 1-3 минут.
В зависимости от степени окраски проба бывает: а) слабо положительной ( + )—слабо розовое окрашивание, появляющееся через 2-3 минуты; б) положительной (+ +) — отчетливая фиолетовая окраска, появляющаяся через 1-2 минуты; в) резко положительной (+ + +) — фиолетовая (вишневая) окраска, появляющаяся сразу же после нанесения мочи, которая через 1-2 минуты становится более интенсивной; г) отрицательной (—) — цвет смеси не изменяется.
