Общие сведения о биохимическом анализе крови

В организме кровь выполняет две весьма важные функции, а именно:

1) Функция перемещения компонентов необходимых для клеточной жизни, представляя собой, таким образом путь, по которому передвигаются все элементы, необходимые клеточному обмену.
Кровь несет к тканям: питательные вещества, антитела, кислород, необходимый для биологического горения, гормоны и некоторые ферменты, она удаляет С02, получаемую в результате имеющего место в клетках сгорания, бесполезные или вредные для обмена продукты разрушения и т.д.

2) Функция регулирования и постоянного поддержания физико-химических свойств внутренней среды: изотонии и изотермии.

Вышеуказанное свидетельствует об особом значении определения в крови электролитов, продуктов обмена веществ, витаминов, а также прочих биохимических «констант», поскольку эти определения дают клиницисту сведения, в которых он нуждается для подтверждения или отрицания того или иного диагноза.

Взятие крови

По возможности отбор крови следует производить только утром, натощак. Небольшие количества крови (0,1–0,2 мл) можно взять из мякоти пальца или мочки уха, которые промывают эфиром, осушивают, затем делают укол иглы, причем кровь отсасывается микропипеткой, на краю которой имеется резиновая трубка с наконечником. Укол должен быть достаточно глубоким для того, чтобы не нужно было надавливать на ткань.

Большие количества крови отбираются из локтевой вены, либо стекая кровь непосредственно из вены через иглу в пробирку, либо отсасывая ее шприцом. Игла и шприц предварительно стерилизуются кипячением, в течение 15–20 мин. Как шприц, так и игла и пробирка должны быть чистыми
и сухими, так как следы воды или спирта на стенках могут вызвать гемодиализ или привести к погрешностям связанным с изменением концентрации крови. Наконец, следует отметить, что следы хлорированных или глюкозированных растворов могут исказить результаты определений хлора или глюкозы.

Никакое определение не имеет ценности, если кровь была взята неправильно или если посуда, в которую она собиралась не совершенно чистая Стерильная пробирка – это еще не значит, что она вполне чиста с химической точки зрения, так как она может содержать следы многих веществ препятствующих или искажающих результаты определений.

После взятия крови пробирка закупоривается ватной пробкой для того, чтобы предупредить испарение водного компонента крови, после чего на пробирку наклеивается этикетка, на которой записывают фамилию больного, номер койки, требуемый анализ (или анализы) и дату.

Предупреждение коагулирования. Биохимическое определение различных компонентов крови производится в цельной крови, в плазме или сыворотке. В первых двух случаях необходимо предупредить свертывание крови, добавляя для этой цели вещество называемое антикоагулянтом.

После взятия крови на антикоагулянте кровь тщательно взбалтывается и ставится на стеллаж предназначенный для анализируемых образцов. Затем приступают к отделению плазмы от эритроцитов, подвергая собранную кровь центрифугированию.

Наиболее часто применяемыми антикоагулянтами являются: фторид натрия, оксалат калия или смесь оксалата аммония и калия, гепарин и хирудин.

1. Фторид натрия применяется главным образом при взятии крови для определения гликемии и мочевины в соотношении 2 мг на 1 мл крови. Фторид натрия осаждает кальций и задерживает лейкоцитарную секрецию; таким образом он одновременно блокирует как коагуляции так и гликолиз.

2. Чистый оксалат калия, в соотношении 2 мг на 1 мл кро№ применяется главным образом при взятии крови для измерения pH, щелочных резервов и определения плазматического и глобулярного хлора. Оксалат натрия очищается рекристаллизацией в горячей воде. Рекристаллизованвая соль превращается в тонкий порошок, затем приготовляется 2% раствор) который нейтрализуют до pH = 7,4 ± 0,2 раствором гидрата калия или щавелевой кислоты в присутствии 0,02% фенола красного в качестве индикатора. Из таким образом нейтрализованного раствора переводят по ОД (20 мг оксалата калия) в предназначенные для сбора пробирки, после чего вода испаряется в сушильном шкафу при 105–110°. Оставшийся в пробирке оксалат калия достаточен для предупреждения коагуляции 10 мл крови.

3. Смесь оксалатов получают растворяя 1,2 г оксалата аммония и 0,8 г оксалата калия в 100 мл дистиллированной воды. В каждую пробирку распределяют по 1 мл. Воду испаряют в сушильном шкафу при 105-1104:. Смесь в 20 мг оксалатов, оставшаяся в пробирке достаточна для предупреждения коагуляции 10 мл крови, без изменения водного содержания.

Разумеется, что оксалаты не применяются в случае, когда производится определение кальция или калия таким образом взятой крови.

4. Гепарин и хирудин в соотношении 6–10 единиц на 1 мл крови представляют собой идеальные антикоагулянты, так как они не изменяют физико-химическое состояние крови. Их используют главным образом при взятии крови для определения неорганических компонентов, для того, чтобы предупредить поступление минеральных элементов, способных изменить распределение неорганических элементов между кровяными шариками и плазмой.

Отделение сыворотки. Сыворотка получается собирая кровь без анти- коагулянта. Оставляют для охлаждения в течение 30 минут до 1 часа при температуре лаборатории. В течение этого промежутка времени кровь свертывается за счет превращения фибриногена в нерастворимый фибрин, образующий сетку, в ячейках которой находятся красные, белые шарики и тромбоциты, образуя кровяной сгусток и выделяя сыворотку. Поскольку верхняя часть сгустка пристает к стенкам пробирки, ее снимают тонкой стеклянной палочкой, после чего пробирку кладут в термостат при 37°, где сгусток сморщивается, способствуя таким образом отделению кровяной сыворотки, имеющей вид позрачной соломенно-желтой жидкости.

После отделения, сыворотку переводят в центрифужную пробирку, которую тщательно уравновешивают на весах и затем вставляют в центрифугу. Запуск центрифуги должен производиться постепенно, как для того, чтобы предупредить гемолиз эритроцитов неизбеясно сопровождающих сыворотку, имеющий место в случае, если скорость вращения центрифуги слишком велика, так и с целью предупредить преждевременный износ центрифуги.

Как уже было сказано выше, нормальная сыворотка прозрачна и окрашена в соломенно-желтый цвет. Однако в известных условиях сыворотка может изменить свой вид и может быть:

• опалесцентной, когда она содержит жирные частицы, обычно происходящие после приема богатой жирами пшци, а в патологическом состоянии – в течении липоидного нефроза. В этом случае сыворотка становится прозрачной при взбалтывании со спиртно-эфирной смесью;
• желто-бурого цвета, который в нормальном состоянии может явиться следствием вегетарианского (каротеноидного) режима, сопровождаясь такой же пигментацией покровов. В патологическом состоянии эта окраска свидетельствует о том, что сыворотка содержит билирубин в избыточном количестве. В результате окисления в атмосфере билирубин превращается в биливердин, вследствие чего сыворотка приобретает зеленоватый цвет;
• гемолизированная сыворотка характеризуется цветом, изменяющимся от розового до ярко красного вследствие наличия гемоглобина. Обычно это случается вследствие технической ошибки, совершаемой при взятии крови (использование для сбора крови влажного материала: игла, шприц, пробирка и др.). В этом случае осмотическое давление плазмы становится меньше осмотического давления внутри эритроцитов, вследствие чего эти последние поглощают воду, набухают и выделяют гемоглобин явление известное под названием гемолиза

Дезальбуминирование крови или сыворотки. Для наибольшей уверенности определений компонентов крови первая стадия состоит в осаждении белков и получении безбелкового прозрачного фильтрата. Капля этого фильтрата смешанная с каплей 20% сульфосалициловой кислоты на часовом стекле не должна давать осадка. Дезальбуминирование производится с помощью ряда реактивов, среди которых наиболее широко применяемыми являются трихлоруксусная кислота и реактив Фолен-Ву.

1. Трихлоруксусная кислота. Для взвешивания трихлоруксусной кислоты не следует пользоваться костяными или плексигласовыми ложками, а только стеклянными инструментами. Кристаллы трихлорук- сусной кислоты весьма гигроскопичны и поэтому взвешивание должно производиться быстро. Во избежания этого недостатка и для получения раствора точной концентрации обычно прибегают к следующему способу: открывают оригинальную бутылку с трихлоруксусной кислотой и добавляют количество дистиллированной воды, одинаковое по весу с содержанием бутылки. Таким образом получается 100% раствор трихлоруксусной кислоты, из которого затем можно легко приготовить раствор необходимой концентрации. Эту бутылку хранят в холодном месте.

Для дезальбуминирования трихлоруксусной кислотой обычно применяется 10–20% раствор. В пробирку берут некоторое количество крови и затем добавляют такое же количество раствора трихлоруксусной кислоты, хорошо взбалтывают, оставляют в покое на 10 мин. и затем фильтруют или центрифугируют. Фильтрат или надосадочная жидкость должны быть прозрачными.

2. Метод Фолен-Ву. Реактивы: 10% вольфрамат натрия. Раствор не должен иметь слишком кислой реакции, ибо в таком случае нельзя достигнуть полного осаждения белков. Кроме того он не должен содержать молибдата натрия или слишком большого количества карбоната натрия. Для 10 мл этого раствора, титруемого соляной кислотой 0,1 я. (индикатор 1% фенолфталеин) нельзя расходовать более 0,4 мл. И наконец, вольфрамат должен легко растворяться в холодной воде.

Дезальбуминирование: к 8 объемам раствора вольфрамата-сульфата натрия добавляют 1 объем цельной крови, слегка взбалтывают, оставляют в покое на 5 мин., затем добавляют 1 объем серной кислоты н/3, слегка взбалтывают и сейчас же фильтруют. Фильтрование не должно продолжаться более 20–30 минут, так как иначе кровь гемолизируется. Конечное разбавление крови составляет 1/10. Дезальбуминизацию по Фолен- Ву применяют при опеределениях небелкового азота, мочевой кислоты, креатина, креатинина, аминокислот, глюкозы и др.

Другие методы дезальбуминирования, применяемые в биохимической практике будут описаны в соответствующих разделах.