Определение амилазы в моче

Оснащение рабочего места

Для проведение данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Штативы.
2. Капельницы.
3. Градуированные пипетки на 1-10 мл.
4. Химические пробирки.
5. Водяная баня (термостат).
6. Термометры.
7. Колбы мерные на 100 мл.
8. Поваренная соль.
9. Йод кристаллический.
10. Йодистый калий.
11. Крахмал растворимый.
12. Дистиллированная вода.

Для исследования необходима свежевыпущенная моча.

Определение амилазы в моче по методу Вольгемута

Сущность метода состоит в установлении предельного разведения амилазы, при котором еще происходит расщепление крахмала до стадии эритродекстрина.

Для этого метода необходимы следующие реактивы:

1. Физиологический раствор.
2. Раствор Люголя: 1 г йода и 2 г йодистого калия растворяют в 5 мл дистиллированной воды; жидкость разводят дистиллированной водой до объема 300 мл.
3. 1% раствор крахмала: 1 г растворимого крахмала взбалтывают в пробирке в нескольких миллилитрах дистиллированной воды и выливают при помешивании в кипящую воду, налитую в колбочку на 100 мл. Жидкость кипятят до просветления раствора, охлаждают, доводят до метки водой.
4. 0,1% раствор крахмала — готовится из 1% раствора крахмала перед постановкой исследования: 10 мл 1% раствора крахмала в мерной колбе на 100 мл доводят водой до метки.

Техника определения

Нумеруют 10-15 химических пробирок и ставят их в штатив. Во все пробирки, кроме первой, наливают по 1 мл физиологического раствора. В первую и вторую пробирки наливают по 1 мл свежевыпущенной мочи. Содержимое второй пробирки тщательно перемешивают. Начиная со второй пробирки из пробирки в пробирку, переносят по 1 мл смеси и тщательно перемешивают: из последней пробирки 1 мл смеси выливают и таким образом в пробирках получают разведения мочи в 2, 4, 8, 16 раз и т. д. В каждую пробирку добавляют по 2 мл 0,1% раствора крахмала.

Пробирки встряхивают и ставят в водяную баню или термостат на 30 минут при температуре 38°. Затем пробирки охлаждают в очень холодной воде в течение нескольких минут (охлаждение прекращает действие амилазы). Расставляют пробирки по номерам в штатив: в каждую пробирку прибавляют по каплям реактив Люголя до стойкого окрашивания раствора. Учет реакции производят, отмечая цвет содержимого пробирок после добавления реактива Люголя.

При полном расщеплении крахмала амилазой жидкость в пробирках остается бесцветной. При расщеплении крахмала до стадии эритродекстринов возникает красно-фиолетовое окрашивание.

Если же расщепления крахмала не произошло, жидкость окрашивается в синий цвет. Для расчета количество амилазы в исследуемой моче отмечают последнюю пробирку с жидкостью, окрашенной в красно-фиолетовый цвет, после которой содержимое остальных пробирок имеет синее окрашивание.

Пример расчета. В восьмой по счету пробирке имеется красно-фиолетовое окрашивание, а в девятой и последующих пробирках жидкость окрашена в синий цвет. Это свидетельствует о том, что в восьмой пробирке амилаза еще оказывала свое действие. В восьмой пробирке моча разведена в 128 раз. Если 1/128 часть мочи гидролизует 2 мл крахмала, то 1 мл мочи гидролизует его в 128 раз больше.

Отсюда количество амилазы равно 2 X 128 = 256 единиц. Полученные результаты обозначают в условных единицах.

Чтобы не производить расчетов, используют табл. 11.