Определение азотных соединений в моче

Мочевина

Волюметрический метод Поварского

Принцип и реактивы те же, что и при определении в крови.

Техника. Операцию производят точно также, как было показано для крови, причем берут мочу, очищенную трихлоруксусной кислотой 10% и предварительно разбавленной следующим образом: сначала измеряют удельный вес мочи. Моча с удельным весом менее 1010 разбавляется в два раза; моча с удельным весом между 1010 – 1020 – в три раза, а моча с удельным весом свыше 1020 – в четыре раза. Получаемый при определении результат умножают на кратность разбавления: соответственно на 2, 3 или 4.

Примечание. Определение мочевины по этому методу не является точным, так как гипобромит натрия выделяет также азот аммиачных солей, которые рассчитываются также как мочевинный азот. Все же, благодаря своей несложности и быстроте, этот метод применяется в большинстве клинических лабораторий.

Волюметрический метод с аппаратом Ван-Слайка

В воронку аппарата Ван Слайка берут 5 мл мочи, разбавленной 1/100 и поступают так, как было указано для определения мочевины в крови.

Расчет: мочевина мг/100 мл =vxf Х2 000, где v – объем выделенного азота, f – фактор из таблицы Коварского.

Гравиметрический метод с ксантгидролом

Принцип и реактивы те же, что и при определении крови.

Техника. Из мочи, разбавленной 1/20 (5 мл мочи + 95 мл дистиллированной воды) берут 10 мл (0,5 мл мочи), добавляют 10 мл реактива Танера, хорошо встряхивают, затем фильтруют или центрифугируют. К 15 мл прозрачного фильтрата 0,375 мл мочи добавляют 15 мл ледяной уксусной кислоты и 3 мл прозрачного раствора ксантгидрола 10%, добавление ксантгидрола производят в три приема, с промежутками по 10 минут. Оставляют в покое на 3 часа, затем операции продолжаются так как было показано при определении мочевины в сыворотке.

Этот метод более трудоемкий, однако, он дает очень точные результаты и в то же время является специфичным.

Мочевая кислота

Метод Гопкинс-Роншэз

Принцип. Осаждение мочевой кислоты в виде урата аммония титруемого йодометрически.

Реактивы:

1. Аммиак.
2. Хлористый аммоний.
3. Раствор аммиака-хлористого аммония. Растворяют 150 г хлористого аммония в 500 мл дистиллированной воды, добавляют 150 мл аммиака, дополняя объем до 1 000 мл дистиллированной водой.
4. Ледяная уксусная кислота 10%.
5. Бура в порошке.
6. Йод 0,1 н.
7. Крахмал 1%.

Техника. К 100 мл мочи добавляют 15 мл аммиака (1) и 15 г хлористого аммония (2). Встряхивают, оставляют в покое на 30 минут, затем фильтруют. Осадок урата аммония промывают 2–3 раза раствора аммиака – хлористого аммония (3), затем растворяют в 300 мл дистиллированной воды и добавляют уксусную кислоту 10% до нейтрализации аммиак® (индикатор – лакмусовая бумажка). Добавляют порошок буры (5) до отчетливого перехода лакмусовой бумажки в синий цвет и титруют йодом 0,1 н. (6) до получения желтой окраски или появления синей окраски (с крахмалом 1%, добавляемым к концу титрирования), которая должна быть устойчивой в течение 10–15 секунд.

Расчет: 1 мг йода 0,1 н. соответствует 0,008 4 г мочевой кислоты.

Мочевая кислота г/л = 0,084 ХП + 0,01

где: п – мл йода 0,1 н., израсходованных для титрования; 0,01 – коррекция растворимости.

Нормальные значения. В норме, в выделяемой за сутки моче, содержится 0,70 г мочевой кислоты.

Аммиак

Метод Серенсен-Роншэз

Принцип. В нейтрализованной моче аммониевые соли разлагаются формалином по уравнению:

4NH4C1 + 6СН20 (CH2)eN4 + 4НС1 + 6Н20

Получаемая при разложении соляная кислота эквивалентна разложенным солям и титруется NaOH 0,1 н.

Реактивы:

1. Фенолфталеин 8 % (насыщенный раствор в спирте).
2. Едкий натр 0,1 н.
3. Нейтрализованный формалин.

Смешивают 10 мл формалина 40% с 20 мл дистиллированной воды, добавляют несколько капель фенолфталеина 1% и нейтрализуют NaOH 0,1 н. до появления розовой окраски. Реактив приготовляют непосредственно перед употреблением.

Техника. К 10 мл мочи добавляют 10 мл прокипяченной и охлажденной дистиллированной воды и 10 капель насыщенного раствора фенолфталеина 8% затем по каплям добавляют NaOH 0,1 н. до появления бледнорозовой окраски. В этот момент добавляют 20 мл нейтрализованного формалина (2). Розовый цвет исчезает вследствие кислот, образовавшихся в результате разложения аммониевых солей. Эту кислотность титруют NaOH 0,1 н. до появления бледнорозовой окраски, отмечая количество миллилитров, израсходованных на титрование.

Расчет. 1 мл NaOH 0,1 н. соответствует 0,001 76 г аммиака или 0, 001 446 г азота.

Аммиак г/л = пх0,001 76x100

Азот г/л = пх0,001 446x100, где п = количество миллилитров NaOH израсходованных для титрования.

Примечание: При разложении аммониевых солей разлагается также и часть содержащихся в моче амминокислот. Количество аммиака, соответствующее этим кислотам, составляет 10 или 15% представляющих собой собственно погрешность метода. Несмотря на эту погрешность метод имеет фактическую химическую ценность, благодаря его несложности.

Метод Шлезинга

Принцип. Разложение аммониевых солей гидратом кальция, выделяющего только соответствующий аммиак.

Реактивы:

1. Цианистая ртуть 2%.
2. Гидрат кальция 20%.
3. Соляная кислота 0,1 н.
4. Едкий натр 0,1 н.
5. Ализаринсульфонат натрия 1%.

Техника. На дно небольшого эксикатора конструкции Шлезинга (диаметром 10–12 см) помещают фарфоровую чашку, в которую вливают 20 мл мочи, 5 капель раствора цианистой ртути 2% (1), и 10 мл гидрата кальция 20% (2). На треугольник, поддерживаемый суженным участком эксикатора быстро ставят другую чашку, в которую берут 10 мл серной кислоты 0,1 н. (3), затем эксикатор плотно закрывают крышкой, края которой были предварительно смазаны вазелином. Оставляют в покое на 3 дня, для того чтобы аммиак полностью выделился. По мере его выделения, он поглощается серной кислотой 0,01 н. из чашки. Затем избыток серной кислоты титруют едким натром 0,1 н. (4) в присутствии 3 капель ализаринсульфоната натрия 1% (5) в качестве индикатора.

Расчет. 1 мл серной кислоты 0,1 н. соответствует 0,001 7 г аммиака.

Примечания. В присутствии глюкозы цианистая ртуть может выделять небольшие количества аммиака. В этом случае, если моча содержит глюкозу, гидрат кальция 20% замещают 0,5 г безводного карбоната кальция и 2 г хлористого натрия, причем в эксикаторе выдерживают 5 дней вместо 3.

В отсутствие эксикатора конструкции Шлезинга можно использовать и другой эксикатор несколько больших размеров.

Метод несложен и чувствителен, однако, имеет тот недостаток, что результат можно получить только через 3 дня.

Физиопатологические изменения. В норме моча, выделяемая за 24 часа, содержит 0,5 – 1 г аммиака. Мочевой аммиак значительно увеличивается при заболеваниях, сопровождающихся ацидозом, как например сахарный диабет (2–3 г в сутки), причем он может достигнуть 7–12 г/сутки (при диабетической прекоме) и значительно спадает при тяжелых почечных недостаточностях – до нуля.

Общие аминокислоты

Формалин-титриметрический метод Серенсена

Принцип. Тот же, как и при определении в крови. Однако с формалином вступают в реакцию и аммониевые соли, освобождающие соляную кислоту, так что одновременно с аминокислотами определяется также и мочевой аммиак.

Реактивы:

1. Хлористый барий в порошке.
2. Фенолфталеин 1%.
3. Гидрат бария, насыщенный раствор.
4. Соляная кислота 0,1 н.
5. Нейтрализованный формалин (10 мл формалина 40% нейтрализуют едким натром 0,1 н.), индикатор – фенолфталеин(1 %).
6. Едкий натр 0,1 н.

Техника. В мерную колбу на 100 мл берут 50 мл мочи, 2 г порошкообразного хлористого бария (1) и 2 капли фенолфталеина 1 % (2), затем добавляют насыщенный раствор Ва(ОН)2 (3) до получения красной окраски.
В этот момент дополнительно добавляют 5 мл из того же раствора, для осаждения фосфатов и карбонатов. Колбу закупоривают, оставляют в покое на 15 минут, после чего дополняют до метки кипяченой и охлажденной дистиллированной водой, слегка встряхивают и фильтруют.

Берут 20 мл прозрачного фильтрата (10 мл мочи) и нейтрализуют соляной кислотой 0,1 н. (4) (индикатор – лакмусовая бумажка), затем добавляют 10 мл нейтрализованного формалина (5) и 10 капель фенолфталеина и титруют кислотность едким натром 0,1 н. (6) до появления красной окраски, идентичной с получаемой у контрольного образца, свежеприготовленного из: 30 мл кипяченой и охлажденной дистиллированной воды, 10 мл нейтрализованного формалина, 10 капель фенолфталеина 1 %.

Расчет. 1 мл NaOH 0,1 н. соответствует 0,000 352 г аммиака или 1,4 мг аминного азота.

(Аммиак – аминокислоты) в г/л аммиака = n X 0,000 352 X 100.

Аминовый азот. Мг/100 мл = n X 1,4 X 100 где п–мл NaOH 0,1 н. израсходованных для титрования.

Примечание. Из этих результатов следует вычесть соответствующее значение мочевого аммиака, который определяют отдельно, по вышеописанному методу Шлезинга.

Физиопатологические изменения. В нормальной моче за 24 часа содержатся 100–300 мл аминокислот, из которых наиболее важными являются лизин, фенилаланин, триптофан, аргинин, гистидин, гликокол и цистин. Режим питания весьма мало влияет на аминоацидурию.

Гипераминоацидурия может быть:

а) вторичной в результате гипераминоацидемии, возникшей вследствие тяжелой недостаточности печени, цирроза, рака печени, атрофии печени или существенного протидного катаболизма: кашексия, гипертиреоидизм, обширные ожоги, генерализованные формы рака, надпочечниковая кортикотерапия, диабет с ацидозом, прогрессивные мышечные дистрофии, отравление ураном, свинцом, ртутью и т.д.

б) специфичной: гистидинурия при беременности;

в) первичной с аминоцидемией в норме: синдром Тони-Дебре- Фанкони, гепатолентикулярное перерождение, цистинурия, алкаптонурия и др.

Креатинин

Принцип. Тот же, что и при определении в крови.

Реактивы.

1. Очищенная пикриновая кислота, насыщенный раствор (около 1–2%).
2. Едкий натр 10%.
3. Стандартный раствор креатинина: 1 мл = 0,10 мг креатинина. Техника. В мерную колбу на 100 мл берут 2 мл мочи и добавляют 3 мл пикриновой кислоты 1–2%(1) и 1 мл NaOH 10% (2), оставляют в покое на 5 минут, затем дополняют до метки дистиллированной водой. Паралельно приготовляют образец с 2 мл стандартного раствора креатинина (3) вместо мочи, к которому добавляют те же реактивы. Слегка встряхивают и спустя 10 минут оба образца сопоставляют на колориметре Дюбоска.

Креатин+Креатинин

Метод Бенедикт-Майерса

Принцип: Тот же, что и при определении в крови.

Реактивы:

• соляная кислота н.
• едкий натр н.
• реактивы, необходимые для определения креатинина.

Техника. В мерную колбу на 100 мл, оснащенную обратным холодильником берут 50 мл мочи, добавляют 5 мл соляной кислоты н. (1) и кипятят с орошением в течение 15 минут при 117°, затем охлаждают и нейтрализуют 5 мл едкого натра н. (2). Объем дополняют до 100 мл дистиллированной водой, хорошо гомогенизируют и берут 4 мл (2 мл мочи) для определения креатинина по вышеописанному способу.

Физиопатологические изменения. В соответствующей норме моче, в течение 24 часов, выделяется 1,2–1,5 г креатинина. Гипер-креатининэмии встречаются при богатой белками диете, а также при мышечной атрофии и интенсивных мышечных нагрузках. Кроме того, креатинин увеличивается при лихорадке, тифе, пневмонии, характеризующимися значительными нарушениями белков.

Общий азот

Метод Кьельдаля

Принцип. Тот же, что и для определения в крови. Определение производят на 0,2 – 0,5 мл мочи по способу микрокьельдаля, причем количество общего азота, выводимого с мочой в сутки, составляет 25-35 г.

Примечание. В случае содержащей глюкозу мочи, сначала минерализацию следует проводить очень медленно. При необходимости от времени до времени добавляют весьма малые количества спирта 95%.
Моча, содержащая альбумин, предварительно очищается трихлоруксусной кислотой 10% для удаления альбуминного азота. Если операция производится с неочищенной мочой, то из общего количества мочевого азота, установленного при анализе, вычитывают альбуминный азот.

Индикан

Качественный анализ. Реакция Яффе

К 15 мл мочи добавляют 1,5 мл ацетата свинца 10% встряхивают и фильтруют. К 10 мл прозрачного фильтрата добавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты, 2–3 мл хлороформа и 2–3 капли хлористого кальция 5%. Пробирку закупоривают пробкой, переворачивая 15–20 раз. Хлороформ извлекает индиго, осаждается на дно и окрашивается в синий цвет.

Добавленный в избытке хлористый кальций окисляет индиго в желтоватый изатин, препятствуя, таким образом, появлению синей окраски. Если речь идет о нормальной моче, водный слой окрашивается в зелено синий, а хлороформный – синий цвет.

Реакция Обермайера

К 20 мл мочи добавляют 2 мл ацетата свинца 10%, встряхивают и фильтруют. Из прозрачного фильтрата берут 10 мл, к которым добавляют 10 мл реактива Обермайера (растворяют 0,2 г хлорного железа в 100 мл концентрированной соляной кислоты), приготовленного непосредственно перед употреблением и 2–3 мл хлороформа. Пробирки закупоривают пробкой, затем встряхивают, опрокидывая 15–20 раз. В присутствии индикана хлороформный экстракт окрашивается в синий цвет.

Примечание. В случае появления осадка хлористого свинца, определение повторяют, причем используют меньшее количество ацетата свинца.

Определение методом Кумона

Принцип. Конденсация индола с нингидрином дает продукт красного цвета, который извлекают хлороформом и сравнивают колориметрически со стандартным раствором мочевого индикана.

Реактивы.

1. Ацетат свинца 20%.
2. Соляная кислота 10%.
3. Нингидрин 3%.
4. Хлороформ.
5. Стандартный раствор индикана: растворяют 10 мг мочевого индикана в 100 мл дистиллированной воды в мерной колбе, добавляя 1 г фтористого натрия: 1 мл содержит 0,1 мг индикана. Раствор не портится в течение продолжительного времени.

Техника. К 10 мл мочи добавляют 0,5 мл 2% ацетата свинца (1), встряхивают и фильтруют. Из прозрачного фильтрата берут 5,25 мл (5 мл мочи), добавляют 1 мл соляной кислоты 10% (2) и 3–4 капли раствора нингридрина 3% (3), затем погружают на 3 минуты в кипящую водяную баню. После охлаждения смесь переводят в разделительную воронку, добавляют 5 мл хлороформа (4) и встряхивают для разделения продукта конденсации, что ведет к исчезновению красной окраски в водном слое. Оставляют в покое на 3 минуты, затем отделяют хлороформный экстракт красного цвета. Параллельно с этими операциями приготовляют также эталон для сравнения, используя для этого 5–25 мл раствора индикана (0,525 мг) вместо мочи и затем поступают как указано выше. Спустя 5 минут полученные окраски сопоставляют на колориметре Дюбоска.

Физиопатологические изменения. Нормальная моча взрослого за сутки содержит 4–5 мг индикана в случае смешанного режима и 15–20 мг при исключительно мясном режиме. Детская моча содержит весьма малое количество индикана. Повышенные количества индикана встречаются при беременности, аппендиците, перитоните, легочном туберкулезе и др. При почечной недостаточности индикан снижается в моче и повышается в крови.