Изучение сухой массы лимфоцитов в норме и при патологии

Возможности и перспективы применения метода интерференционной микроскопии для характеристики других гемопоэтических элементов и, в частности, лимфоцитов еще мало изучены. Однако можно предполагать, что различные по своему происхождению лимфоциты, обладающие разной способностью к белковому синтезу, будут отличаться по содержанию в их структурах плотных веществ.

Значительные отличия величине сухой массы обнаружены в ядрах лейкемических лимфобластов по сравнению с нормальными лимфоцитами. Установлено, что количество плотных веществ возрастает не только в предмитотических клетках, удвоивших свою массу. Оно повышается в ядрах лимфобластов и в том случае, когда они имеют диплоидное количество ДНК, то есть обладают нормальным числом хромосом (46). Следовательно, лейкемические клетки содержат больше белка, чем нормальные. Если считать ядерные белки генетическими репрессорами, увеличение которых приводит к снижению генетической экспрессии, то, по мнению Lampert (1968), можно предположить, что дедифференцирование лейкемических клеток происходит не путем деблокирования, а вследствие подавления генетических функций возросшим количеством репрессорного белка.

Определение сухой массы клеток костного мозга у мышей-самцов линии LAFi показало, что у интактных животных все костномозговые элементы по этому показателю распределялись на пять групп. Авторы полагают, что полученные данные могут быть использованы в качестве контрольных при изучении действия на костный мозг облучения и лекарственных препаратов.

Таким образом, имеющиеся немногочисленные сообщения о    применении интерференционной микроскопии для изучения лимфоидных клеток свидетельствуют о возможности получить с помощью этого метода новые интересные факты.

В нашей лаборатории изучалась величина сухой массы лимфоцитов периферической крови новорожденных и детей первого года жизни. Этот же показатель определялся в лимфоцитах тимуса, костного мозга и периферической крови у мышей линии BALB/c различного возраста. Всего обследовано 100 детей и 50 лабораторных животных.

Для обследования отбирались дети, родившиеся в срок от здоровых матерей, имевших нормальное течение беременности и родов с оценкой по шкале Апгар 8–10 баллов. На первом году жизни они ничем не болели, и им не проводились профилактические прививки в течение трех месяцев, предшествующих обследованию.

Величина сухой массы лимфоцитов периферической крови определялась у детей в 1, 3, 5, 7, 14 и 30 сутки после рождения, в возрасте от 1 до 3, от 3 до 6, от 6 до 9 и от 9 до 12 месяцев.

Накануне обследований производился тщательный клинический осмотр, изучался морфологический состав периферической крови, количество Т- и В-лимфоцитов. Полученные данные сравнивались с нормативами, установленными для детей Сибири. При наличии каких-либо отклонений в общем состоянии или лабораторных показателях дети из дальнейших исследований исключались. Особое внимание уделялось изучению лимфоцитов, их возрастной динамике.

Полученные данные показали, что у детей в первые сутки после рождения количество лейкоцитов колебалось в широком диапазоне – от 14,65-109/л до 34,50-109/л, составляя в среднем (20,99+0,95) • 109/л. В последующие дни жизни, оно постепенно снижалось и к концу периода новорожденно сти достигало (10,10+0,43) • 109/л (Р<0,001). Тенденция к уменьшению числа лейкоцитов сохранялась и на первом году жизни. Наиболее низкие показатели – (8,99+0,31) • 109/л определялись в возрасте 9–12 месяцев (табл. 9, рис. 28).

Рис. 28. Возрастная динамика лейкоцитов 1, абсолютного количества нейтрофилов 2 и лимфоцитов 3 у новорожденных и детей первого года жизни

Лейкоцитарная формула детей в первые сутки после рождения характеризовалась нейтрофильным профилем. Число нейтрофилов составляло 69,86+1,01% и лимфоцитов – 22,19+ + 1,13%. Наблюдалась «зеркальная» динамика процентного соотношения нейтрофилов и лимфоцитов с перекрестом на пятый день жизни (рис. 29). К концу периода новорожденное™ относительное количество лимфоцитов достигало наиболее высоких значений – 67,66+1,48 (р <С 0,001), которое достоверно не изменялось в течение всего грудного возраста (р> >0,05):

Рис. 29. Возрастная динамика нейтрофилов 1 и лимфоцитов 2 у новорожденных и детей первого года жизни (%)

Несмотря на небольшую в процентном отношении величину, благодаря физиологическому лейкоцитозу абсолютное количество лимфоцитов в первые сутки после рождения было достаточно высоким–(4,66+0,24) • 109/л.

Среди лимфоцитов периферической крови у детей в первые семь дней жизни преобладали крупноклеточные крупноядерные элементы, имевшие высокое ядерно-цитоплазматическое отношение, ядра чаще бобовидной формы с нежной хроматиновой структурой и иногда с наличием ядрышка.

Количество типичных малых лимфоцитов составляло всего 13,30±0,89% –15,60±0,55%. К месячному возрасту наблюдалось значительное уменьшение крупноклеточных крупноядерных форм, в то время как содержание малых лимфоцитов увеличивалось до 38,80±1,40% (р<0,001). Их число продолжало повышаться и в последующие возрастные периоды и наиболее высоких значений (82,*20±2,28%) достигало к концу первого года жизни (р<с0,001).

Изучение планиметрических величин лимфоцитов показало, что наибольший средний диаметр как клеток, так и их ядер определялся в первую неделю жизни (табл. 10). к концу периода новорожденности он уменьшался соответственно.

Таким образом, в процессе роста и развития организма ребенка наблюдаются как количественные, так и качественные изменения в популяции лимфоцитов периферической крови. Обнаруженные нами закономерности возрастной кинетики лимфоцитов полностью соответствуют литературным данным.

Изучение субпопуляций лимфоцитов периферической крови новорожденных и грудных детей показало, что в первые сутки после рождения число Т- и В-клеток в относительном и абсолютном выражении составляло соответственно 36,68± ±2,25% и (1,87±0,30) • 109/л, 24,00±1,76% и (1,29±0,17) • 109/л. Характерно, что в этом возрасте среди лимфоцитов, циркулирующих в сосудистом русле, превалировали О-клетки. 

Итак, в период новорожденности и на первом году жизни происходят изменения не только в количестве лимфоцитов, циркулирующих в периферическом русле крови, но и возникают существенные сдвиги в соотношении их субпопуляций.

Результаты приведенных выше исследований дали основание предположить, что с возрастом детей по мере созревания лимфоцитарной системы и повышением в периферической крови доли клеток, способных к синтезу иммуноглобулинов, сухая масса лимфоцитов должна увеличиваться, и этот тест можно использовать, для характеристики их субпопуляций.

По нашим данным, плотный остаток отдельных лимфоцитов у детей в первые сутки после рождения колебался в большом диапазоне – от 25 до 90 пг, при средних значениях 52,40+1,46 пг (табл. 13, 14). Популяция лимфоцитов по величине сухой массы была неоднородной, на что указывали значимые уровни коэффициентов асимметрии (А–-1,32) и эксцесса (Е= 1,02), а кривая распределения носила двухвершинный характер. Первый, более высокий, пик был представлен клетками с твердым компонентом 45 пг, второй, более низкий – клетками с сухой массой 55 пг (рис. 30). Индивидуальные вариации среднего содержания плотных веществ в лимфоцитах у детей этой группы составляли 43,32– 57,58 пг.

На третий день жизни величина сухой массы лимфоцитов существенно не менялась и равнялась 51,13+1,15 пг (р> >0,05). Их популяция оставалась неоднородной (А=0',67; Е=0,89), а распределение вариант продолжало носить двухвершинный характер с пиками в области клеток с сухой массой 45 и 55 пг. Индивидуальные колебания показателя в группах составляли в пределах 44,31–56,76 пг, а вариации плотности отдельных лимфоцитов составляли 25–90 пг.

У детей в возрасте пять и семь суток содержание плотных веществ в лимфоцитах оставалось относительно постоянным со средними значениями 51,26+0,94 пг и 51,55+0,76 пг. Не происходило значительных сдвигов в распределена клеток по этому признаку. Приблизительно в тех же пределах (45,61–59,54 пг) варьировала и величина сухой массы лимфоцитов у отдельных детей. Прежним оставался и диапазон колебаний показателя в популяции лимфоцитов (25–100 пг).

Однако, начиная с двухнедельного возраста, появлялась  тенденция к увеличению твердого компонента клеток до 54.38±0,94 пг (р>-0,05), которая сохранялась до конца неонатального периода. При этом сухая масса повышалась до 54,88+0,83 пг, и различия, по сравнению с данными детей первых семи дней жизни, становились статистически значимыми (р<0,05). Структура популяции лимфоцитов оставалась неизменной с наличием двух характерных пиков.

На первом году жизни величина плотного остатка лимфоцитов варьировала в диапазоне 54,79+0,78 пг – 55,51+0,41 пг без статистически значимых возрастных изменений (р>0,5). Однако сопоставление показателей грудных детей с результатами, полученными у новорожденных, указывало на наличие тенденции к увеличению сухой массы лимфоцитов по мере роста и развития организма ребенка. Различия в величине плотного остатка этих клеток у новорожденных в первую неделю жизни и детей старше шести месяцев статистически значимы (р<0,02). Обращали на себя внимание и изменения диапазона индивидуальных колебаний среднего содержания сухих веществ в лимфоцитах. Так, в неонатальный период этот показатель варьировал в пределах 43,32–59,54 пг, в то время как на первом году жизни он колебался от 50,56 до 100.

Рис. 31. Распределение лимфоцитов периферической крови по величине сухой массы у детей грудного возраста, по оси абсцисс – величина сухой массы (пг); по оси ординат – количество клеток в процентах: А– у детей от 1 до 3 месяцев; 5 – у детей от 3 до 6 месяцев; В – у детей от 6 до 9 месяцев; Г – у детей от 9 до 12 месяцев

Нами также вычислялось отношение сухой массы к объему клетки, которое отражает концентрацию сухого вещества внутри лимфоцита и долю воды. Установлено, что наибольшей доля воды была в клетках новорожденных, в то время как концентрация плотных веществ была более высокой у детей грудного возраста (табл. 15).

Отмечено, что лимфоциты новорожденных отличались меньшей концентрацией плотных веществ и большим содержанием воды по сравнению с таковыми у детей грудного возраста.

Нами также изучалась величина сухой массы лимфоцитов крови и центральных лимфоидных органов у экспериментальных животных.

Опыты производились на 50 мышах линии BALB/c, которые в соответствии с возрастными периодами были разделены на V групп: I – ранний неонатальный период (возраст I сутки); II– конец периода новорожденности (возраст 5 суток); III – период смешанного питания (возраст 21 сутки); IV – переход на самостоятельное питание (возраст 28 суток); V – половозрелые животные (возраст 2-3 месяца).
Согласно нашим данным у мышей линии BALB/c в ранний неонатальный период общее количество лейкоцитов крови составляло (12,53+2,84) • 109/л (табл. 16). Относительное и абсолютное число лимфоцитов равнялось соответственно 25,50± ±2,96% и (3,20±0,37)-109/л.

В морфологическом отношении лимфоциты крови представляли собой неоднородную группу. Основная их часть имела небольшие размеры и была подобна малым лимфоцитам крови взрослых животных. Однако, наряду с ними присутствовали крупноклеточные крупноядерные формирования.

Диаметр лимфоцитов крови у мышей в первые сутки  рождения варьировал от 6,0 до 10,5 мкм. Большую часть  (90%) составляли лимфоциты с диаметром 6–8 мкм, только в 10% встречались крупные формы с линейным размерами 8,5–10,0 мкм. В среднем диаметр лимфоцитов у мышей этого возраста был равен 7,41 ±0,03 мкм (табл. 17).

К концу неонатального периода (на пятый день жизни животных) наблюдалась тенденция к снижению числа лейкоцитов в крови до (9,80±0,84 • 109/л. Однако по сравнению с показателями в первые сутки после рождения это различие было статистически недостоверным (р>0,2). Появлялась тенденция к уменьшению относительного и абсолютного количества нейтрофилов. Возрастал процент лимфоцитов до 34,57±3,61 % (р < 0,05), но их абсолютные    величины (3,39±0,35) • 109/л существенно не изменялись (р>>0,2). Среди лимфоцитов, циркулирующих в сосудистом русле, по прежнему встречались крупноклеточные крупноядерные элементы. Средний диаметр лимфоцитов составлял
7,36±0,03 мкм (р>0,05).

На 21-й и 28-й дни жизни число лейкоцитов равнялось соответственно (9,66±0,76) • 109/л и (10,19±0,84) • 109/л и достоверно не отличалось от этого показателя у неонатальных мышей (р>0,5). В гемограмме наблюдалось выраженное уменьшение незрелых и зрелых форм нейтрофилов. Относительное и абсолютное содержание лимфоцитов продолжало увеличиваться. Так, у 3-недельных мышей оно составляло 61,39+ ±3,05% и (5,93± 0,29) - 109/л, а у 4-недельных – 64,00±3,46% и (6,52±0,35) • 109/л, что достоверно превышало показатели новорожденных животных (р<0,001). Крупноклеточные крупноядерные формы лимфоцитов в этом возрасте уже не обнаруживались.

У половозрелых животных общее количество лейкоцитов статистически значимо не отличалось от такового в других возрастных группах. В лейкоцитарной формуле отмечалось дальнейшее снижение нейтрофилов и наиболее  высокого уровня достигали лимфоциты.Средний диаметр лимфоцитов половозрелых животных – 32±0,04 мкм был меньше, чем у мышей предыдущих возрастных групп (р<0,05).

Рис. 32. Распределение лимфоцитов крови по величине сухой массы у мышей линии BALB/c различного возраста

Таким образом, у мышей линии BALB/c по мере роста и развития организма наблюдались значительные изменения со стороны системы крови. Гемограмма новорожденных  характеризовалась нейтрофильным профилем со смещением лейкоцитарной формулы влево. При морфологическом исследовании среди лимфоцитов новорожденных мышей обнаруживались крупноклеточные крупноядерные формы с нежной хроматиновой структурой ядра. У животных в возрасте 21 и 28 суток эти клетки из периферической крови исчезали. С возрастом намечалась тенденция к уменьшению линейных размеров лимфоцитов, и различия между этим показателем у неонатальных и половозрелых мышей становились статистически значимыми.
Сухая масса лимфоцитов крови у мышей в первые сутки после рождения колебалась в широком диапазоне – от 20 до 90 пг при средних значениях 41,70±0,44 пг. Кривая их распределения по величине плотного остатка носила асимметричный и двухвершинный характер с более высоким пиком в области клеток с твердым компонентом 35 пг и более низким – 45 пг (рис. 32). Математический анализ структуры популяции циркулирующих лимфоцитов по величине плотного остатка подтвердил ее неоднородность, на что указывали значимые уровни коэффициентов асимметрии (А = –1,11) и эксцесса (Е = = 1,70) (табл. 18).

В последующие возрастные периоды содержание сухих веществ в лимфоцитах крови существенно не изменялось. Так, у пятидневных, 3-, 4-недельных и половозрелых животных оно достигало соответственно 41,87+0,49 пг; 41,35+0,51 пг и 40,61+0,49 пг и достоверно не отличалось от показателей у однодневных мышей (р>0,05). Не происходило значительных сдвигов и в распределении клеток по этому признаку. Оно характеризовалось теми же особенностями, которые описаны у новорожденных животных.

Итак, величина сухой массы лимфоцитов, циркулирующих в крови у мышей всех возрастных групп, не имела существенных различий. Их популяция по этому признаку была неоднородной, а кривая распределения носила двухвершинный характер. Первый, более высокий пик был представлен лимфоцитами с плотным остатком 35 пг и другой, более низкий – с сухой массой 45 пг.

Следовательно, как у детей, так и у лабораторных животных выявлены однотипные особенности распределения лимфоцитов по содержанию плотных веществ.

Изучение массы тимуса, его клеточностй, клеточной плотности, морфологического состава, линейных размеров и количества плотных веществ в тимоцитах у мышей линии BALB/c различного возраста показало, что эти параметры претерпевают существенные изменения в процессе постнатального онтогенеза.

Установлено [Пахряева Г. Н. и соавт., 1982], что у мышей в первые сутки после рождения масса тимуса колебалась в пределах 3,0–6,0 мг, составляя в среднем 4,65+0,43 мг. Клеточность органа варьировала от 4,90 • 106 до 9,95 • 106 со средними значениями (8,02+0,78) * 106, а клеточная плотность составляла (2,13+0,42) • 106/мг при вариации индивидуальных показателей от Г,08-106/мг до 2,98-106/мг (табл. 19).

Морфологический состав вилочковой железы (табл. 20) у мышей этого возраста характеризовался наличием значительного количества бластных элементов – 13,07+1,18%. Оно отличались большими размерами (10–12 мкм и более), нежной структурой ядра, в котором часто обнаруживались одно или более ядрышек, базофильной цитоплазмой, не содержащей включений и вакуолей. В 12,96+1,42% встречались клетки меньших, по сравнению с бластами, размеров с диаметром от 8 5 ДО 9,5 мкм.Они характеризовались более плотной упаковкой хроматина. В их ядрах при окраске азур-эозином значительно реже выявлялись ядрышки. Основную массу клеток составляли малые тимоциты с диаметром до 7,5 мкм, правильных очертаний.

В среднем размеры тимоцитов у мышей в первые сутки после рождения составляли 7,36+0,05 мкм (табл. 22).

Среди клеток вилочковой железы определялись единичные плазмоциты, моноциты, незрелые и зрелые гранулоциты.

Клеточная плотность оставалась величиной относительно постоянной, и у животных этих возрастных групп варьировала от (2,35+0,47) • 106/мг до (2,70+0,41) • 106/мг (р>0,2).

Количество бластов (12,32+1,23%) и средних лимфоцитов (13,86+1,28%) на 5-й день жизни мышей оставалось высоким. Не изменялось и число малых тимоцитов 71,15+2,29% (р>0,1). Однако к моменту перехода животных на смешанное (21 сутки) и самостоятельное (28 суток) питание число бластных клеток снижалось соответственно до 7,39+0,69% и 5,94+0,84% и средних лимфоцитов до 9,41+0,71% и 8,5б± +3,25%, что достоверно ниже показателей новорожденных мышей (р<0,001). В противоположность этому количество малых тимоцитов увеличивалось. Содержание других форменных элементов статистически значимо не менялось (табл. 21).

Количество ферментположительных клеток при окраске на кислую фосфатазу колебалось от 94,28+2,58% до 97,26+ 2,29% без статистически значимых возрастных различий (р>>0,5), а продукт реакции в тимоцитах располагался в виде отдельных крупных гранул ярко-красного цвета.

У половозрелых животных (возраст 2–3 месяца) происходило отчетливое снижение массы тимуса до 40,90+5,04 мг (р<0,001) и его клеточности до (92,28+10,77) • 106 (р<<0,001), в то время как клеточная плотность была стабильной и составляла (2,77±0,25) • 106/мг (р>0,5).

Морфологический состав тимуса характеризовался достоверно меньшим, по сравнению с новорожденными животными, количеством бластных клеток– 3,72+0,54% (р*<0,05), средних лимфоцитов - 7,15+0,57% (р<0,01) и большим количеством малых форм - 85,74+1,23 (р<0,05). Достоверно уменьшались и линейные размеры клеток, составляя в среднем 7,12±0,04 мкм (р<0,001). Число фосфатазоположительных тимоцитов оставалось прежним – 97,40+2,44% (р>>0,05).

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о значительном увеличении массы тимуса и его клеточности с момента рождения до 28-го дня жизни. У половозрелых животных эти показатели снижались. Морфологический состав тимуса у неонатальных мышей отличался наиболее высоким содержанием больших (бластов) и средних лимфоцитов.

С возрастом их количество падало. Однако даже у половозрелых животных число бластных форм было значительным, что совпадает с данными литературы и свидетельствует о том, что способность клеток тимуса к пролиферации остается высокой и во взрослом организме. По мере роста и развития животных уменьшались и линейные размеры тимоцитов. Минимальный средний диаметр определялся у половозрелых мышей, что совпадало с наименьшим количеством больших и средних лимфоцитов в этом возрасте. Подавляющее большинство клеток вилочковой железы давало положительную реакцию на кислую фосфатазу с характерным распределением продукта реакции в виде отдельных четких гранул.

Лимфоциты вилочковой железы у животных в первые cvтки после рождения характеризовались широким размахом колебаний величины сухой массы – от 25 до 125 пг =35,33%). При этом индивидуальные значения в группе варьировали от 34,80 до 50,92 пг, а средние значения составляли 41,96±0,62 пг (табл. 23). Большинство клеток (84%) имели плотный остаток в пределах – 25–55 пг, причем чаще всего встречались тимоциты с твердым компонентом, равным с сухой массой от 60 до 125 пг, которые при морфологическом исследовании идентифицировали как бласты и средние лимфоциты. Наличие этих клеток обусловливало асимметричность распределения тимоцитов по количеству плотных веществ (рис. 33).

К концу периода новорожденности величина сухой массы клеток тимуса не претерпевала существенных изменений и составляла 41,66±0,95 пг (р>0,5). Весьма широким оставался разброс количества плотных веществ в отдельных тимоцитах (от 25 до 130 пг), а коэффициент вариации (V) равнялся 36,64%.

Индивидуальные значения показателя в группе животных этого возраста варьировали в диапазоне 34,01 – 50,97 пг. Кривая распределения тимоцитов по величине твердого компонента сохраняла асимметричный характер за счет присутствия крупных тяжелых клеток.

На 21-й и 28-й дни жизни среднее содержание плотных веществ в тимоцитах, по сравнению с показателями неонатальных животных, достоверно не изменялось.

Рис. 33. Распределение тимоцитов по величине сухой массы у мышей

У половозрелых мышей, по сравнению с животными всех предыдущих возрастных групп, количество плотных веществ в тимоцитах было наиболее низким – 36,80±0,56 пг. Сухая масса большинства клеток (93%) колебалась в пределах 25-55 пг. Значительно уменьшалось количество крупных тяжелых элементов. Их число не превышало 7,0. Итак, содержание сухих веществ в отдельных тимоцитах широко варьировало у животных всех возрастных групп. В среднем величина их плотного остатка у новорожденных и молодых мышей была более высокой, чем у половозрелых, что связано со значительным снижением среди клеток тимуса в последней возрастной группе доли бластов и средних лимфоцитов. Однако в какие бы сроки не обследовались животные, наиболее часто встречались тимоциты с сухой массой 35 пг. Математический анализ показал, что популяция клеток вилочковой железы по величине плотного остатка неоднородна во всех возрастных группах. Кривая их распределения по этому признаку асимметрична и островершинна. кривой обусловлена присутствием крупных тяжелых элементов, которые при морфологическом исследовании можно было идентифицировать как бласты и средние лимфоциты.

Костный мозг мышей линии BALB/c в ранний неонатальный период был полиморфным, богатым клеточными элементами. Лимфоциты составляли 19,45±1,42% от всех ядросодержащих клеток. По морфологическим признакам они существенно не отличались от малых тимоцитов. Лимфоциты костного мозга имели правильные очертания, округлую форму, ядра с плотной упаковкой хроматина без нуклеол и голубую цитоплазму, не содержащую включений и вакуолей. Однако, в отличие от малых тимоцитов, их ядра характеризовались более светлой окраской. Диаметр костномозговых лимфоцитов колебался в узком диапазоне — от 6,0 до 8,5 мкм (V = = 7,49%) при средних значениях 7,35±0,02 мкм (табл. 24). Клеток с диаметром более 8,5 мкм не встречалось.

По мере роста и развития организма животных число лимфоцитов продолжало возрастать и наиболее высоких значении (23,20+1,35%) достигало у половозрелых мышей (р<<0,03). Средний диаметр костномозговых лимфоцитов, начиная с 4-недельного возраста, имел тенденцию к снижению и наиболее низкие значения (7,29+0,03 мкм и 7,30+0,02 мкм) констатировались у 4-недельных и взрослых животных (р<<0,05). Количество фосфатазотрицательных клеток варьировало в пределах 92,18+1,04%–93,30+1,40% без статистически значимых возрастных различий.Величина плотного остатка костномозговых лимфоцитов у мышей в первые сутки после рождения колебалась в пределах 70 пг. Пик кривой распределения приходился на клетки с сухой массой 45 пг, а средняя величина составляла 43,27+0,36 пг. Как по размерам, так и по количеству плотных веществ популяция костномозговых лимфоцитов была однородной, что подтверждалось незначимыми коэффициентами асимметрии (А=–0,45) и эксцесса (Е=–0,40), а распределение вариант в совокупности подчинялось закону Гаусса.

Рис. 34. Распределение лимфоцитов костного мозга по величине сухой массы у мышей линии BALB/c различного возраста. По оси абсцисс – величина сухой массы (пг); по оси ординат – количество клеток в процентах; А – у мышей в возрасте 1 сутки; Б – у мышей в возрасте 5 суток; В – у мышей в возрасте 21 сутки; Г – у мышей в возрасте 28 суток; Д – у половозрелых животных

С возрастом животных, по мере уменьшения диаметра костномозговых лимфоцитов, наблюдалось снижение их сухой массы. Так, к моменту перехода мышей на самостоятельное питание она составляла 42,06+0,33 пг и у половозрелых жирных достигала наиболее низких значений – 40,90+0,32). Популяция лимфоцитов костного мозга по содержанию плотных веществ оставалась однородной с нормальным распределением показателей, а вершина кривой лежала в области клеток с твердым компонентом, равным 45 пг.

Таким образом, в процессе постнатального онтогенеза в- костном мозге мышей линии BALB/c наблюдается постепенное увеличение количества лимфоцитов. Характерной их особенностью является малая вариабельность как по диаметру, так и по содержанию плотных веществ, однородность по этим признакам с распределением вариант в совокупности, подчиняющимся закону Гаусса. Типичным для костномозговых лимфоцитов является отсутствие кислой фосфатазы в подавляющем большинстве клеток.

Итак, результаты проведенных исследований свидетельствуют о глубокой перестройке популяции лимфоцитов тимуса, костного мозга и крови в процессе постнатального онтогенеза. Установлено, что содержание сухих веществ в клетках тимуса варьирует в широком диапазоне, и популяция лимфоцитов этого органа не однородна во всех возрастных группах. Математический анализ распределения клеток вилочковой железы по величине их плотного остатка показал, что во всех случаях оно является асимметричным и островершинным. При графическом изображении пик кривой приходился на тимоциты с сухой массой 35 пг. Асимметричность кривой обусловливали крупные тяжелые клетки, которые при морфологическом исследовании идентифицировали как бласты и средние лимфоциты. Следовательно, разнородность тимоцитов по количеству плотных веществ можно связать с их высокой пролиферативной способностью и наличием в популяции элементов, находящихся в S – и О2 периодах клеточного цикла.

В отличие от тимоцитов, количество сухих веществ в лимфоцитах костного мозга варьировало в меньших пределах. Совершенно иной характер носило их распределение по этому признаку. У мышей всех возрастных групп, начиная с новорожденных и кончая половозрелыми животными, кривая распределения была симметричной с вершиной в области клеток с твердым компонентом 45 пг.

Таким образом, лимфоциты костного мозга оказались более тяжелыми по сравнению с малыми тимоцитами. Пики распределения клеток костного мозга и вилочковойжелезы по величине плотного остатка не совпадали у животных всех возрастных групп (рис. 35).

Рис. 35. Распределение лимфоцитов тимуса 1 и костного мозга 2 по величине сухой массы у мышей линии BALB/c различного возраста. По оси абсцисс – величина сухой массы (пг); по оси ординат – количество клеток в процентах: А – у мышей в возрасте 1 сутки; Б – у мышей в возрасте 5 суток; В – у мышей в возрасте 21 сутки; Г – у мышей в возрасте 28 суток; Д – у половозрелых животных

Характерной особенностью тимоцитов была положительная реакция на кислую фосфатазу, которая выявлялась в виде отдельных четких гранул. Это позволило, в соответствии с данными Л. А. Ивановой и соавторов (1979), отнести большую часть последних к В-клеткам.

Неоднородность популяции лимфоцитов периферической крови по количеству ротных веществ и двухвершинный характер их распределения по этому признаку, по всей вероятности, обусловлены наличием более легких Т- и более тяжелых В-клеток.

В заключение следует подчеркнуть, что литературные данные и результаты, полученные в нашей лаборатории, свидетельствуют о перспективности применения интерференционной микроскопии для изучения гемопоэтических клеток как в норме, так и при патологических состояниях.

Ее использование для определения сухой массы эритроцитов позволило охарактеризовать структуру их популяции у здоровых людей и при ряде заболеваний, изучить некоторые закономерности гемоглобинизации эритрона в физиологических и патологических условиях. Этот метод дал возможность выявить возрастные и половые различия гемоглобинсинтетических процессов в клетках костного мозга. С его помощью обнаружены глубокие перестройки в структуре популяции эритроцитов по содержанию гемоглобина при физиологически протекающей беременности, анемиях различной этиологии, лейкозах, ожоговой болезни, вирусном гепатите и др. Установлено, что распределение эритроцитов по величине сухой массы, а следовательно, и гемоглобина, изменялось значительно раньше снижения общегематологических показателей, что позволяет рекомендовать этот тест в качестве критерия ранней диагностики нарушении гемоглобинсинтезирующей функции эритрона.

Применение интерференционной микроскопии для изучения лимфоидных элементов показало, что их популяция по величине твердого компонента неоднородна. Отмечено, что В-тимоциты, обладающие способностью к синтезу иммуноглобулинов, имеют и более высокое, по сравнению с Т-клетками, соответствующих веществ.

Выявлены существенные различия в содержании сухих веществ в ядрах лимфоцитов здоровых людей и лейкемических лимфобластов даже в тех случаях, когда последние имели диплоидный набор хромосом.
Таким образом, определение сухой массы лимфоцитов с помощью метода интерференционной микроскопии может служить одним из дополнительных критериев, характеризующих субпопуляции этих клеток.

Можно полагать, что более широкое использование интерферометрий в гематологических исследованиях существенно расширит и дополнит информацию о функциональном состоянии клеток крови в физиологических и патологических условиях как в клинике, так и в эксперименте.