Определение нуклеиновых кислот в крови
Из сложных белков особое значение как вещества, играющие ведущую роль в передаче наследственных признаков, в синтезе белка, во многих процессах обмена, имеют нуклеопротеиды. Нуклеопротеиды состоят из белка и сложных полинуклеотидов или нуклеиновых кислот, которые в своем составе содержат азотистые основания, углеводы (моносахариды) и фосфорную кислоту. Различают рибо-(РНК) и дезоксирибонуклеиновые (ДНК) кислоты в зависимости от того, какой моносахарид – рибоза или дезоксирибоза – входит в их состав.
Так как все три компонента (азотистое основание, углевод и фосфорная кислота) входят всегда в постоянных молярных концентрациях (в отношении 1:1:1) в состав нуклеиновых кислот, определение нуклеиновых кислот обычно проводят, исследуя содержание какого- либо одного из указанных компонентов.
Принцип метода
Метод основан на экстракции нуклеиновых кислот (суммарного-количества РНК и ДНК) горячей хлорной кислотой с последующим определением нуклеинового фосфора в растворе фотометрированием при 270 и 290 г; по концентрации нуклеинового фосфора вычисляют содержание нуклеиновых кислот. Точность метода ±10%.
Аппаратура
- Спектрофотометр СФ-4.
- Центрифуга электрическая.
- Водяная баня.
Посуда
- Широкие центрифужные пробирки на 30–40 мл.
- Микропипетки на 0,1 мл.
- Пипетки на 1 и 2 мл.
- Мерный цилиндр на 20–25 мл.
- Воронки стеклянные (малого размера).
- Пробирки химические.
Реактивы
0,5 и 0,6 н. растворы хлорной кислоты.
Ход анализа
Определение нуклеиновых кислот в крови. 0,1 мл крови помещают в 1,4 мл воды, предварительно налитой в широкие центрифужные пробирки, размешивают. К полученному гемолизату прибавляют 13,5 мл 0,6 н. раствора хлорной кислоты и перемешивают. Пробирку помещают на 20 минут в сильно кипящую водяную баню и закрывают маленькой воронкой. За это время происходит полный гидролиз нуклеиновых кислот, связанных с белками, и осаждение белков. Затем пробирку охлаждают струей воды из крана и центрифугируют 10–15 минут при 1500 об/мин. Жидкость сливают в чистую пробирку и фотометрируют при 270 и 290 mu в кювете с рабочей длиной в 10 мм против 0,6 н. раствора хлорной кислоты.
Определение нуклеиновых кислот в тканях
Навеску материала от 5 до 500 мг заливают точно отмеренным количеством (5-10 мл) 0,5 н. раствора хлорной кислоты и нагревают на кипящей водяной бане 20 минут. Дальнейший ход анализа и расчет те же, что и при определении нуклеиновых кислот в крови (А. С. Спирин).
