Определение резус-фактора
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Центрифужные пробирки.
- Пипетки.
- Штативы.
- Водяная баня.
- Лупа с двукратным увеличением.
- Сыворотка антирезус 2-х серий.
- Стандартные (контрольные) эритроциты.
- Исследуемые эритроциты.
- 10% желатина.
- 0,9% раствор поваренной соли.
Определение резус-фактора ускоренным методом конглютинации с применением желатины
Предварительная обработка испытуемой крови и стандартных эритроцитов. Кровь для исследования нужно брать в количестве 1-2 мл в обычную пробирку, на которой надписывают фамилию, инициалы и группу крови лица, подвергающегося исследованию.
Обычно после свертывания крови на дне пробирки остается небольшое количество эритроцитов, которые следует употреблять для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, сверток нужно встряхнуть, чтобы добиться отделения большего количества эритроцитов.
Можно брать кровь с изотоническим раствором лимон-нокислого-натрия (0,25 мл на 1 мл крови). В этом случае эритроциты необходимо отмыть. Для этого пробирку доливают доверху физиологическим раствором хлористого натрия, содержимое ее перемешивают и центрифугируют. Отмытые эритроциты употребляют для исследования.
Таким же способом нужно готовить и стандартные эритроциты для контроля.
Допустимо хранить кровь в течение 2-3 суток при температуре 4°.
Техника определения. В штатив устанавливают два ряда центрифужных или каких-либо других пробирок объемом не менее 10 мл (в каждом ряду — по количеству исследуемых образцов эритроцитов и по две пробирки для контрольных исследовании). На каждой паре пробирок надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого взята на исследование.
В соответственно обозначенные пары пробирок вводят но одной капле исследуемых эритроцитов, а в контрольные пробирки — по одной капле контрольных (стандартных) эритроцитов. Затем во все пробирки добавляют по одной капле 10% желатины, предварительно подогретой до разжижения в теплой (40-48°) воде. Перед употреблением желатину нужно просмотреть. Помутнение или появление хлопьев указывает на то, что она непригодна.
Во все пробирки первого ряда добавляют по одной капле сыворотки антирезус одной серии и во все пробирки второго ряда — по одной капле сыворотки антирезус другой серии. После этого содержимое пробирок нужно перемешать встряхиванием и штатив с пробирками поместить в водяную баню при температуре 48° на 3-5 минут.
По извлечении пробирок из водяной бани в них доливают 8-10 мл физиологического раствора хлористого натрия и перемешивают их содержимое путем одно-, двукратного перевертывания (физиологический раствор нужно предварительно подогреть, для чего рекомендуется держать его в той же водяной бане, в которой ставится реакция).
Учет результатов. Пробирки просмотреть на свет невооруженным глазом или через лупу с двукратным увеличением. Результат трактовать по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов.
При положительном результате агглютинаты легко различимы в виде красных зерен или хлопьев на прозрачном, почти обесцвеченном фоне жидкости в пробирке. При отрицательном результате в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет слегка опалесцирующая жидкость.
Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой антирезус (D), резусположительные (Rh+). Образцы эритроцитов, не давшие агглютинации с сывороткой антирезус (D), резусотрицательные (Rh-).
Результаты учитывать при совпадении их в обеих сериях сыворотки антирезус и после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность сыворотки антирезус, т. е. при отсутствии агглютинации со стандартными резусотрицательными эритроцитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резусположительными эритроцитами одноименной группы или групп О (I).
Проведение перекрестной пробы методом конглютинации
На предметное стекло или чашку Петри наносят две капли сыворотки реципиента (но не его цитратной плазмы!) и одну небольшую каплю концентрированной взвеси эритроцитов донора в его собственной сыворотке. После размешивания ингредиентов на предметном стекле при постоянном его покачивании наблюдение за реакцией ведут в течение 5 минут в условиях комнатной температуры. Результаты реакции между сывороткой реципиента и эритроцитами донора при этих температурных условиях разрешают вопрос о групповой совместимости или несовместимости крови. При групповой совместимости крови агглютинации эритроцитов донора в сыворотке реципиента не наступает, при несовместимости крови эритроциты донора агглютинируются сывороткой реципиента.
При групповой совместимости крови реципиента и донора для дополнительного разрешения вопроса об антигенной их совместимости эту же реакцию следует продолжить при температуре 37-42° с последующим наблюдением в течение 5-10 минут.
Легкое прогревание можно производить над любым источником тепла при постоянном покачивании предметного стекла. Необходимо следить за тем, чтобы расположенная па стекле смесь реагентов не подсыхала.
Агглютинация эритроцитов донора сывороткой реципиента, наступающая в коллоидной среде в тепле, указывает на антигенную несовместимость для него крови исследованного донора.
Проба на индивидуальную совместимость
Берут 2 капли сыворотки больного в чашку Петри и к ним добавляют каплю крови донора (консервированной). Капли перемешивают и чашку помещают на 10 минут в сосуд с водой температуры 45°. После этого просматривают результаты. Если кровь донора и кровь реципиента совместимы в групповом отношении и по резус-фактору, то агглютинации не будет. Если появилась агглютинация, то кровь может быть несовместима или по группе, или по резус-фактору (рис. 50). Эта проба рассчитана на то, чтобы исключить несовместимость по резус-фактору; одновременно она исключает групповую несовместимость.
Рис. 50. Проба на совместимость по резус-фактору.
Результаты определений на резус-принадлежность оформляют в бланке анализа.
