Серологические системы крови. Система AB0

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II), В (III) двух серий и ABO (IV).
2. Физиологический раствор.
3. Предметные стекла или тарелки.
4. Иглы Франка.
5. Глазные пипетки.
6. Вата.
7. Спирт.
8. Йодная настойка.

Определение группы крови со стандартными сыворотками

Группа крови определяется по стандартным сывороткам (обязательно двух различных серий).

Подготовительная работа

1. Определение группы крови производят в помещении с достаточным освещением при температуре от 15 до 25°.
2. Определение производят на белых тарелках или предметных стеклах.
3. На левой стороне каждой тарелки или каждого предметного стекла надписывают «0(1)», в середине — «А (II)», на правой стороне—«В (III)». Посередине верхнего края тарелки или стекла отмечают фамилию исследуемого лица.
4.  На стол ставят два комплекта — в каждом 3 стаканчика или маленький штатив с тремя гнездами. В левом стаканчике или в гнезде штатива находится ампула с сывороткой группы Осф (I), в среднем — ампула с сывороткой группы Ар (II) и в правом — ампула с сывороткой группы Ва (III). В ампулы с сывороткой опускают по одной сухой чистой глазной пипетке. В отдельном стаканчике ставится ампула с сывороткой группы ABO (IV), употребляемой в качестве дополнительного контроля.
5. На столе устанавливают флаконы с физиологическим раствором, настойкой йода, стаканчик с водой и гигроскопическую вату.

Техника определения группы крови по стандартным сывороткам

1. На тарелку или предметное стекло у обозначения 0(1), А (II), В (III) последовательно наносят по одной крупной капле сыворотки групп Осф (I), Ар (II) и Ba(III). Каждую пипетку, после того как из нее будет выпущена капля сыворотки, немедленно опускают в ту ампулу с сывороткой, из которой она была взята.
2. Перед нанесением укола для взятия крови палец обтирают спиртом. Укол производят в мякоть пальца иглой. Три капли крови (каждая величиной с булавочную головку) последовательно переносят стеклянной палочкой на тарелку или предметное стекло и наносят рядом с сыворотками групп Осф (I), Ар (II), Ва (III).
3. Отметив время, другой стеклянной палочкой или углом чистого предметного стекла перемешивают кровь с сывороткой группы 0(1) до получения равномерной смеси. Другой стеклянной палочкой или другим углом предметного стекла перемешивают другую каплю крови с сывороткой группы Ар (II) и то же проделывают с сывороткой группы Ва(Ш). Можно перемешивать кровь с сывороткой одной и той же палочкой, но в этом случае после размешивания каждой капли нужно промывать палочку в стакане с водой и насухо вытирать ее.
4. Определение группы крови производят в течение 5 минут (следить по часам) при покачивании тарелки.
5. По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минут в капли, в которых она наступила, следует добавить по одной капле физиологического раствора хлористого натрия и продолжать наблюдение при покачивании тарелки до истечения 5 минут.
6. При каждом определении группы крови необходимо пользоваться тремя стандартными сыворотками групп 0сф(1), Ар (II) и Ва (III) двух различных серий для каждой группы (титр серий может быть различным), причем для каждой сыворотки результаты одной серии должны совпадать с результатами другой серии.

Примечание. На одной и той же тарелке может быть осуществлено определение группы крови по стандартным сывороткам двух различных серий. На верхней половине тарелки используются три стандартные сыворотки ОаР (I), Ар (II) и Ва (III) одних серий, a па нижней половине — три сыворотки других серий.

Оценка результатов реакции изогемагглютинации

1. Реакция изогемагглютинации может быть положи¬тельной или отрицательной. При положительной реакции в течение первой минуты от начала перемешивания и, следовательно, еще до прибавления физиологического раствора в смеси появляются видимые невооруженным глазом мельчайшие красные зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка совсем пли почти совсем обесцвечивается.
2. При отрицательной реакции жидкость все время (5 минут) остается равномерно окрашенной в розовый цвет и в ней нельзя обнаружить никаких зернышек.
3. При проведении работы стремя сыворотками групп Оар (I), Ар (II) и Ва (III) возможны четыре комбинации положительных и отрицательных реакций (рис. 49).

Рис. 49. Оценка результатов реакции изогемагглютинации

Если все три сыворотки дали отрицательную реакцию, т. е. все смеси остались равномерно окрашенными в розовый цвет, испытуемая кровь принадлежит к группе О (I).

Если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы Ар (II), а сыворотка групп Осф (I) и Ва (III) дали положительную реакцию, т. е. в них появились зерна агглютинации, то испытуемая кровь принадлежит к группе А (II).

Если сыворотка группы Ва (III) дала отрицательную реакцию, а сыворотки групп Оар (I) и Ар (II) — положительную, то испытуемая сыворотка относится к группе В (III).

Если все три сыворотки дали положительную реакцию, то испытуемая кровь относится к группе АВ (IV). Однако в этих случаях для исключения неспецифической агглютинабельности исследуемых эритроцитов необходимо провести дополнительное контрольное исследование со стандартной гемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV). Для этого на тарелку наносят большую каплю сыворотки АВ (IV) и к ней добавляют маленькую каплю (с булавочную головку) исследуемой крови. Сыворотка и кровь перемешиваются, после чего результат наблюдают в течение 5 минут. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии ее в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп Оар (I), Ар (II) и Ва (III), позволяет считать реакцию специфичной и отнести исследуемую кровь к группе ABO (IV).

Возможные ошибки при оценке результатов реакции изогемагглютинации

Агглютинация может не выявиться:

• при избытке крови, если взята слишком большая капля ее;
• при высокой температуре окружающего воздуха, например в жаркую погоду.

Установление групповой агглютинации при фактическом отсутствии ее может иметь место в двух случаях:

• кучки из «монетных столбиков» принимают за агглютинационные зерна;
• появление зерен в смеси вследствие наступившей неспецифической холодовой агглютинации — панагглютинации — принимают за специфическую групповую агглютинацию.

Прибавление физиологического раствора с последующим покачиванием уничтожает «монетные столбики» и панагглютинацию.

Во всех сомнительных случаях необходимо произвести повторную реакцию, а также определение группы крови и по стандартным эритроцитам 0(1), А (II) и В (III) групп.