Бактериоскопическое исследование мочи на микобактерии туберкулеза
Для бактериоскопического исследования мочи на наличие микобактерий туберкулеза необходимо подготовить препараты и окрасить их специальными способами. Микобактерий туберкулеза выделяются с мочой в небольшом количестве, поэтому для успешного их обнаружения необходимо собрать суточное количество мочи, в которое должна обязательно входить утренняя порция.
Из суточного количества мочи собирают осадок и центрифугируют его в течение 5-10 минут. После центрифугирования осадок помещают на чистое предметное стекло и подсушивают на воздухе или в термостате. Высушенные препараты фиксируют путем троекратного проведения над пламенем горелки. Препарату дают остыть, а затем помещают его для дополнительной фиксации в смесь Никифорова (спирт и эфир, взятые в равных объемах) на 10 минут. Фиксированный препарат окрашивают по Цилю-Нильсену.
Приготовление препаратов с помощью флотации (обогащения). В литровую колбу помещают 200-300 мл исследуемой мочи и прибавляют 1-2 мл толуола или ксилола. Содержимое колбы взбалтывают в течение 20 минут и доливают дистиллированной водой до заполнения горлышка колбы. Колбу оставляют стоять 1-2 часа. В течение этого отрезка времени на поверхности жидкости образуется кремообразный раствор толуола или ксилола, в котором концентрируются микобактерии туберкулеза. К этому времени подготовляют водяную баню и устанавливают над ней мостик, на который помещают стерильное предметное стекло. Образовавшийся слой осторожно снимают стерильной пипеткой с резиновой грушей и переносят на предметное стекло, помещенное над парами кипящей водяной бани. Препарат высушивают, фиксируют, как было описано выше, и окрашивают по Цилю-Нильсену.
Окрашенные препараты рассматривают под микроскопом с применением иммерсионной системы, с целью максимального просмотра препарат продвигают от одного края к другому, тщательно изучая каждое поле зрения.
Микобактерии туберкулеза представляют собой тонкие, слегка изогнутые рубиново-красного цвета палочки, расположенные по одной или группами на синем фоне препарата.
Встречаются также микобактерии туберкулеза, фагоцитированные лейкоцитами (рис. 16). В моче иногда встречаются сапрофиты, весьма сходные с микобактериями туберкулеза. Это палочки смегмы, кислото- и спиртоустойчивые, поэтому по Цилю-Нильсену они также окрашиваются в красный цвет. В отличие от микобактерий туберкулеза палочки смегмы более толстые и короткие, встречаются в сочетании с различными микроорганизмами и плоским эпителием. Отличить их от микобактерий туберкулеза иногда бывает очень трудно. В сомнительных случаях применяют способ, в основе которого лежит большая устойчивость микобактерий туберкулеза к 0,01% раствору гипохлорида калия, используемого для обесцвечивания.
Приготовление реактива (0,01% раствора гипохлорида калия). 25 г хлорной извести растворяют в 300 мл дистиллированной воды и сильно взбалтывают; 14 г углекислого калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды, сильно взбалтывают и оставляют на 6-8 часов; затем оба раствора фильтруют через вату или марлю в одну колбу. Оставшийся на вате осадок промывают 100 мл дистиллированной воды. Смесь отстаивают и затем декантируют. В результате получают 1% раствор гипохлорида калия, который образуется в результате взаимодействия хлорной извести и углекислого калия. Этот раствор называют жавелевой водой. Он стоек.
Для работы основной раствор (1%) разводят в 100 раз (0,01%). Для обесцвечивания окрашенного препарата иммерсионное масло осторожно стирают с препарата ваткой, смоченной бензином или ксилолом, и на мазок наливают 0,01 % раствор гипохлорида калия, который оставляют па 45 минут, а затем смывают.
Сапрофиты при этом обесцвечиваются, а микобактерии туберкулеза сохраняют красный цвет.
