Определение желчного пигмента в моче

Определение билирубина и его производных в моче производят по специальному требованию врача. В тех же случаях, когда моча имеет подозрительный на наличие желчных пигментов цвет — зеленовато-желтый, желтушно-желтый или насыщенно желтушно-желтый, — лаборант обязан произвести реакцию на билирубин независимо от указаний лечащего врача.

Исследуемую мочу взбалтывают и устанавливают цвет образующейся пены (пена мочи, содержащей билирубин, приобретает желтушный оттенок).

Качественные пробы, предназначенные для определения билирубина, основаны на его превращении под влиянием окислителя в изумрудно-зеленый билевердин.

Билирубин определяют одной из следующих проб:

1. пробой Накояма;
2. пробой Гмелина;
3. сухой пробой на билирубин.

Рассмотрим каждую из этих проб более подробно.

Проба Накояма

Для этой пробы необходимы следующие реактивы:

1. 10% раствор хлористого бария: 10 г хлористого бария растворяют в цилиндре дистиллированной водой и доливают до метки 100 мл.
2. Реактив Накояма: к 1 мл концентрированной соляной кислоты приливают 99 мл 96° спирта и 0,4 мл 10% раствора хлорного железа.
3. Крепкая азотная кислота.

Постановка реакции. В центрифужную пробирку помещают 5 мл мочи кислой реакции, приливают 5 мл 10% раствора хлористого бария, смешивают и центрифугируют. Жидкость сливают. К осадку приливают 2-3 мл реактива Накояма, смешивают, энергично взбалтывают и нагревают над пламенем горелки. В присутствии билирубина возникает зеленое окрашивание. После этого центрифугируют осадок, сливают надосадочную жидкость и приливают к осадку концентрированную азотную кислоту. Зеленое кольцо, образующееся в осадке, указывает на присутствие билирубина.

Проба Гмелина

Для пробы Гмелина применяют азотную кислоту, содержащую примесь азотистой. Для получения последней концентрированную азотную кислоту помещают в чашку Петри и выдерживают на ярком дневном свету в течение нескольких дней до пожелтения, которое и будет указывать на наличие в ней примеси азотистой кислоты. Этот же реактив можно получить нагревая небольшое количество азотной кислоты с обломком дерева или спички в пробирке до момента окрашивания кислоты в желтый цвет.

Постановка реакции. 100-200 мл мочи фильтруют несколько раз через один и тот же бумажный фильтр. Влажный фильтр расправляют и сушат на сухой фильтровальной бумаге. После высыхания фильтра на его середину наносят каплю азотной кислоты с примесью азотистой. Образуются цветные кольца; присутствие среди них зеленого кольца свидетельствует о наличии билирубина.

Сухая проба на билирубин

В последнее время находит распространение так называемая сухая проба на билирубин. На специальную индикаторную бумагу наносят каплю исследуемой мочи. При наличии билирубина образуется зеленое окрашивание.