Подсчет тромбоцитов в крови

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Предметные стекла простые и шлифованные.
2. Смесители для эритроцитов.
3. Камеры Горяева.
4. Микроскопы.
5. Микроскоп с фазовоконтрастным устройством.
6. Черная бумага.
7. Ножницы.
8. Осветитель для микроскопа.
9. Сернокислый магний (MgS04).
10. Кокаин.
11. Хлористый натрий.
12. Лимоннокислый натрий.
13. Дистиллированная вода.
14. Метиловый спирт или смесь Никифорова (смесь равных частей 96° этилового спирта и эфира).
15. Основной раствор краски Романовского.
16. Иммерсионное масло.
17. Набор инструментов для укола в палец.

Тромбоциты - это небольшие образования величиной 2-3 мю. В них различают периферическую часть, напоминающую цитоплазму (гиаломер), и центральную зернистую часть, похожую на ядро (грануломер). Морфологические особенности гиаломера и грануломера зависят от возраста и состояния организма.

Для подсчета тромбоцитов требуются следующие реактивы:

1. 14% раствор сернокислого магния (MgS04): 14 г MgS04 помещают в колбу на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл. Раствор магнезии может быть заменен 5% раствором лимоннокислого натрия [(приготовление см. статью «Реакция оседания эритроцитов (РОЭ) по Панченкову»]. Эти реактивы препятствуют склеиванию тромбоцитов.
2. Реактив для подсчета тромбоцитов в счетной камере Горяева: 3 г кокаина и 0,4 г хлористого натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

Взятие крови для подсчета тромбоцитов в мазке

Подсчет в крови тромбоцитов производят по указанию врача. На очищенный спиртом и эфиром палец больного помещают каплю стерильного 14% раствора сернокислого магния или 5% раствора лимоннокислого натрия и через каплю реактива делают укол в палец. Выступившую каплю крови смешивают с помощью парафинированной стеклянной палочки или пастеровской пипетки с реактивом, готовят мазки крови и окрашивают их в течение 40-60 минут краской Романовского, разведенной на нейтральной дистиллированной воде так же, как для мазков крови.

Тромбоциты окрашиваются в розовато-фиолетовый цвет. Параллельно в смеситель берут кровь для подсчета эритроцитов (см. тему «Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере»).

Подсчет тромбоцитов производят с ограничителем поля зрения (по Фонио). Для этого из кусочка бумаги вырезают кружок, по размеру равный 15-копеечной монете, складывают пополам и вчетверо, вершину конуса срезают, в результате чего в центре круга образуется «окошко» (рис. 35). Ограничитель поля зрения вставляют в окуляр (на металлический мостик), предварительно сняв верхнюю линзу окуляра. Вновь навинтив верхнюю линзу, вставляют окуляр в тубус микроскопа. С ограничителем поля зрения насчитывают в среднем 50 эритроцитов в каждом поле зрения микроскопа. Пользуясь иммерсионной системой, одновременно в мазке подсчитывают эритроциты и тромбоциты. Подсчет тромбоцитов заканчивают, насчитав 1000 эритроцитов. По ходу подсчета результаты записывают на бумаге. Затем в камере Горяева подсчитывают количество эритроцитов в 1 мм3 крови. Зная количество эритроцитов в 1 мм3 и количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов, производят расчет.

Пример расчета. На 1000 эритроцитов подсчитано 70 тромбоцитов. Количество эритроцитов в 1 мм3 крови (подсчитаны в камере Горяева) составляет 4 200 000. Количество тромбоцитов в 1 мм3 равно:
70x4200000/1000 = 294 000.

Практически количество подсчитанных тромбоцитов умножают на первые четыре цифры числа эритроцитов, подсчитанных в камере Горяева. Норма тромбоцитов при подсчете по этому методу 200 000-400 000 в 1 мм3.

Подсчет тромбоцитов в счетной камере

Подсчет тромбоцитов в счетной камере производят следующим образом. Кровь набирают в смеситель для эритроцитов до метки 0,5, а раствор кокаина - до метки 101 и оставляют на 30 минут. Меланжер встряхивают, выпускают первые две капли, а третью каплю вносят в камеру Горяева, которую помещают на 5 минут во влажную камеру. Подсчет тромбоцитов производят так же, как и подсчет эритроцитов. Поэтому к подсчитанному количеству тромбоцитов приписывают четыре нуля. Подсчет можно производить как при обычном освещении микроскопа, так и с помощью фазовоконтрастного устройства. В камере Горяева тромбоциты имеют вид блестящих округлых образований, в несколько раз меньших, чем эритроциты. Этот метод отличается точностью и быстротой.

Норма тромбоцитов при подсчете по этому методу 150000-250000 в 1 мм3 крови.