Измерение водных разделов
Внеклеточная жидкость
Метод с роданатом натрия
Принцип. Инъецированный внутривенно в известном количестве роданат натрия равномерно распространяется во внеклеточном пространстве и таким образом по истечении 60 минут от момента инъекции в сыворотке можно определить недиффундированное количество.
Реактивы.
- Стерильный раствор роданата натрия. Растворяют 11,7 г сухого вещества в 100 мл дистиллированной воды в мерной колбе. Концентрацию проверяют титрованием, производимым н раствором азотнокислого серебра (индикатор – железные квасцы 5%).
- Трихлоруксусная кислота 20%.
- Железный реактив, состоящий из 33,45 г хлорного железа, 25 мл концентрированной азотной кислоты и дистиллированной воды до 1000 мл.
Техника. Больного взвешивают утром натощак и затем для контроля у него берут образец в 10 мл крови. Затем внутривенно впрыскивают 10 мл (очень точно замеренных) нормального раствора роданата натрия (1). Спустя 60 минут собирают еще 10 мл крови. Сыворотку отделяют, берут по 2 мл сыворотки из каждого образца в центрифужные пробирки и добавляют 2 мл трихлоруксусной кислоты 20% (2). Хорошо встряхивают, оставляют в покое в течение 5–10 минут, затем центрифугируют. К 2 мл прозрачной надосадочной жидкости добавляют 2 мл железного реактива (3). Затухание образца отсчитывают на фотометре Пульфриха с кюветой на 5 мм и фильтром на 470 м(л, используя в качестве слепого образца сывороточный контрольный образец, также обрабатываемый 2 мл железного реактива. Затухание относят к стандартной кривой и затем подсчитывают концентрацию роданата в мг/100 мл.
Стандартную кривую строят с помощью серии стандартных растворов, содержащих от 1 до 2 мг% роданата натрия. К 2 мл из каждого разбавления добавляют 2 мл трихлоруксусной кислоты и 4 мл железного реактива, после чего производят отсчет на фотометре Пульфриха в сопоставлении со слепым образцом, содержащим 2 мл дистиллированной воды, 2 мл трихлоруксусной кислоты и 4 мл железного реактива.
Нормальные значения изменяются в пределах 24–29% живого веса.
Примечания. Несмотря на простоту и несложности выполнения, все же метод дает завышенные результаты по сравнению с фактическими, так как роданат проникает в эритроциты и печоночную паренхиму. Кроме того, роданат не совсем безвреден в отношении токсичности. Более точные результаты получаются при применении метода с инулином, но этот метод отличается значительной трудоемкостью.
Процентный объем эритроцитов
Метод гематокрита
Используют приспособление Гедина (рис. 50), состоящее из двух капиллярных трубок, отградуированных от 0 до 100, 35–50 мм длины, с просветом в 0,5 мм, монтируемых на металлической раме, приспособленной к оси центрифуги. Трубки можно приготовить разрезая 2 пипетки Потена для подсчета эритроцитов.
Рис. 50. Приспособление Гедин
Техника.
а) Взятие крови производят внутривенной пункцией на гепарине или уколом в мякоть пальца или мочку уха иглой, причем каплю крови смешивают с небольшого размера кристаллом гепарина.
б) Определение. К капиллярным трубкам приспосабливают по одной резиновой трубочке с наконечником, затем осторожно отсасывают кровь, наполняя трубки до деления 100. Трубки монтируются на металлической раме и центрифугируют на высоких скоростях до тех пор, пока высота красной колонки, представляющей эритроциты, не останется без изменения.
Процентный объем отсчитывается непосредственно на капиллярных трубках.
Нормальные значения: Мужчины – 44,6%; Женщины – 40%.
Скоростное определение протеинемии, гематокрита и гемоглобина
Денсиметрический метод
Принцип. Определение удельного веса общей крови и плазмы с использованием ряда растворов сульфата меди известного удельного веса.
Реактивы.
- Гепарин или смесь оксалатов.
- Сульфат меди, насыщенный раствор: в ступке тщательно растирают 1 кг чистого кристаллического сульфата меди (CuS04, 5 Н20), переводят в бутылку на 2000 мл и добавляют 1 250 мл дистиллированной воды. Закупоривают, энергично встряхивают в течение 5–10 минут и точно измеряют температуру, после чего надосадочную жидкость сливают и фильтруют через вату или фильтровальную бумагу в чистую сухую бутылку.
- Раствор сульфата меди уд. вес = 1100; приготовляют из насыщенного раствора.
В зависимости от температуры насыщенного раствора, к концу взбалтывания в градуированный цилиндр на 1000 мл берут количество насыщенного раствора, указанное в таблице XLI и дополняют до 1000 мл дистиллированной водой.
Тщательно смешивают, переворачивая несколько раз цилиндр для гомогенизации жидкости. После встряхивания объем жидкости несколько снижается и поэтому его необходимо снова дополнить до 1000 мл.
4. Стандартные растворы. Стандартные растворы приготовляют пользуясь табл. XLII, в которой приведено число мл раствора сульфата меди (D = 1 100), которые необходимо разбавить до 100 мл, 50 мл или 25 мл, в зависимости от желаемого удельного веса.
Удельный вес получаемых таким образом растворов, необходимо тщательно проверить денсиметром и в случае необходимости откорректировать. Для клинических нужд достаточно приготовить лишь 20 растворов со следующим удельным весом:
1016, 1 020, 1 024, 1 026, 1 028, 1 030, 1 032, 1 036, 1 040, 1 044, 1 048,
1 052, 1 054, 1 056, 1 058, 1060, 1 062, 1 064, 1 068, 1 072, 1 074.
Эти растворы сохраняют в белых стеклянных банках с притертой пробкой, плотно закрытых, во избежание их концентрирования или испарения.
Техника.
а) Взятие крови производят внутривенной пункцией в локтевую складку, непосредственно в пробирки на антикоагулянт: гепарин (0,2 мг на каждый мл крови) или смесь оксалатов. После того как берут кровь, ее тщательно гомогенизируют, переворачивая пробирку несколько раз.
б) Удельный вес общей крови. Кровь отсасывают из пробирки пипеткой Пастера. Затем с высоты одного сантиметра на поверхность жидкости капают одну каплю 1 в раствор сульфата меди известного удельного веса. После того, как капля попадает в сульфат меди, она окружается пленкой протеината меди и осаждается на дно, всплывает на поверхность или же плавает между двумя уровнями в течение 10–20 сек., в зависимости от того, является ли ее удельный вес большим, меньшим или равным удельному весу раствора сульфата меди. В первом случае каплю следует ввести в другой раствор сульфата меди большего удельного веса, а во втором – в раствор меньшего удельного веса, до тех пор, пока не наступит третий случай, то есть удельный вес капли станет равным удельному весу раствора.
в) Удельный вес плазмы. Кровь центрифугируют, плазму отделяют и затем поступают так же как и в случае общей крови, причем однако, используются растворы сульфата меди меньшего удельного веса.
Расчет. После повторных лабораторных исследований авторы разработали приведенную на рис. 51 таблицу для расчета протеинемии, гематокрита и гемоглобина. На перпендикулярной линии справа указаны значения удельного веса крови, увеличивающиеся сверху вниз, на одинаковом расстоянии. На левой перпендикулярной линии приведены значения удельного веса плазмы, уменьшающиеся сверху вниз. На этой линии производится расчет протеинемии г/100 мл. На косой линии, образующей с расположенной справа перпендикулярной линией угол в 7°, с правой стороны отсчитывают гематокрит (процент эритроцитов), а с левой гемоглобин в г/100 мл.
Пример: Предположим, что удельный вес общей крови равен 1056, а удельный вес плазмы составляет 1027. Эти два значения соединяются прямой и на точках пересечения последней с левой перпендикулярной, а также с косой линией, получаем: белки – 7,5 г/100 мл; гемоглобин – 14 г/100 мл; эритроциты – 42%.
Рис. 51. Таблица Филипса-ван Слайка
Примечания. После каждого определения раствор сульфата меди сам автоматически освобождается от введенной жидкости, так как спустя 1–2 минуты капля осаждается на дно, образуя осадок, раствор следует заменить свежим в случае, если этот осадок приблизительно равен осадку в контрольном флаконе, который приготовляют следующим образом: в 50 мл раствора сульфата меди с удельным весом 1026, берут 1,25 мл плазмы. Капля тем меньше, чем тоньше пипетка. Так что с одним и тем же раствором можно производить несколько определений.
Если иногда капля не проникает через поверхность жидкости, флакон необходимо слегка встряхнуть.
Рекомендуется, чтобы температурная разница между кровью и раствором не превышала 50.
В случае недостатка времени или отсутствия возможности получить плазму, определяют только удельный вес общей крови, а для удельного веса плазмы принимается значение 1026. Таким образом ошибка не слишком велика, так как большинство патологических плазм имеют удельный вес в пределах 1021–1031.
Значительно повышенные мочевина и глицемия могут увеличить удельный все общей крови и исказить значение протеинемии. Липемия, напротив, снижает удельный Sec.
Метод дает возможность определить протеинемию и гемоглобин с относительно небольшими погрешностями. Несмотря на то, что для клинических нужд определение объема эритроцитов является удовлетворительным, все же возникающая при этом ошибка в 4 раза превышает при определении гемоглобина. В связи с этим рекомендуется проверка результатов методом гематокрита.
Объем крови
Принцип. Впрыскивание внутривенно сини Эванса – красителя недиффундирующего в ткани и удаляемого весьма медленно. Зная количество впрыснутого красителя, его определение в плазме в момент полной диффузии и до начала его выведения, указывает на его разбавление, и, следовательно, на объем плазмы.
Реактивы.
- Антикоагулянт. Применяют гепарин или смесь оксалатов. Во время сбора пробирку хорошо встряхивают.
- Синь Эванса 0,5%. Отвешивают 0,5 г сини Эванса, переводят в мерную колбу на 100 мл, дополняют бидистиллированной стерильной водой до метки, энергично взбалтывают и оставляют до следующего дня для мацерации красителя. Фильтруют в стерильную колбу, пользуясь стерильной воронкой и фильтровальной бумагой.
Сохраняют на льду в темном месте.
Стандартную кривую для фотометра Пульфриха строят, пользуясь серией разбавления красителя и свежей гепаринированной или оксалатированной человеческой плазмой.
В мерную колбу на 500 мл берут 0,5 мл раствора 0,5% сини Эванса и дополняют до метки плазмой, затем хорошо смешивают. Таким образом, получается разбавление красителя 1/100, остальные разбавления производят по схеме, приведенной в таблице XLIII, исходя из этого основного разбавления.
Техника. Утром, в день проведения теста, больной ничего не ест и не пьет, а накануне не ест никаких жиров, во избежание пищевой липемии, которая может исказить результаты, причем больной остается в постели. Можно впрыскивать 3, 4, 5 или 6 мл красителя. Обычно используются 4 мл, которые вводят в точно градуированный шприц. Подходящей сухой иглой производят пункцию вены, через иглу берут на гепарин или на смесь оксалатов 10–15 мл крови (1). К игле приспособляют шприц, после чего впрыскивают краситель. По окончании инъекции кровь всасывают в шприц и снова нагнетают для того, чтобы ввести все количество красителя. Эту инъекцию производят быстро, точно отмечая момент ее окончания. Спустя 10 минут собирают 10–15 мл крови из другой руки, в аналогичных условиях, как и в первый раз.
Оба образца крови тотчас-же центрифугируют, отделяют плазму и отсчитывают оптическую плотность окрашенной плазмы на фотометре Пульфриха с красным фильтром на 610 мА и кюветой на 5 мм, взяв во вторую кювету плазму, полученную из крови, взятой до впрыскивания красителя (контрольный образец).
Расчет. На основании отсчитанного на фотометре затухания, плазматический объем высчитывают на калибровочной кривой.
Затем, зная также процент эритроцитов, полученный методом Филлипса-ван Слайка, или путем определения гематокрита, подсчитывают объем крови.
Пример: объем крови = объему плазмы + объем эритроцитов. Объем плазмы: 2900 мл; эритроцитов: 47%.
Объем плазмы составляет, следовательно, 53% объема крови.
Примечание. Гемолиз, липемия и значительные количества билирубина являются причинами погрешностей и поэтому их следует избегать.
Оптическая плотность окрашенной плазмы снижается со временем, в связи с чем отсчет на фотометре следует производить немедленно после центрифугирования.
Впрыскиваемое количество красителя должно быть достаточным и не вызывать расстройств, даже без последствий. Со временем избыток красителя может привести к окрашиванию кожи в синий цвет, причем подобный оттенок может быть принят неосведомленным врачом за цианоз.
