Правила проведения лабораторных исследований

Свойственные человеку ошибки, недостаточный опыт работы и неправильное использование оборудования являются причиной большинства лабораторных происшествий и связанных с работой инфекций. Настоящая статья содержит перечень технических приемов, имеющих целью предупредить или свести к минимуму наиболее распространенные инциденты, вызванные этими факторами. Читатель может также получить специальную информацию в разделах, описывающих основные правила работы, оборудование и обучение.

Как пользоваться пипетками и пипетирующими средствами

1. Следует всегда использовать пипетирующие средства. Пипетирование ртом абсолютно запрещено.
2. Ватная пробка у тупого конца пипетки снижает возможность контаминации пипетирующих средств.
3. Категорически исключается продувание воздуха через жидкость, содержащую инфекционные агенты.
4. Инфекционный материал не следует перемешивать путем пипетирования.
5. Инфекционный материал не следует с силой выбрасывать из пипетки.
6. Чтобы избежать случайностей, связанных с потерей капель инфекционных культур с кончика пипетки, рабочую поверхность покрывают материалами, пропитанными дезинфектантом и подлежащими автоклавированию по окончании работы.
7. Следует предпочитать пипетки достаточного объема и соответствующей маркировки, с помощью которых можно переносить материал, не выдавливая его до последней капли.
8. Жидкость из пипетки должна стекать по внутренней стенке пробирки или сосуда либо пипетку следует держать так, чтобы ее кончик был ниже уровня наливаемой в контейнер жидкости.
9. Контаминированные пипетки следует целиком погружать в соответствующий дезинфектант, прежде чем подвергать их автоклавированию.
10. Лоток с использованными пипетками следует держать в рабочем боксе, а не вне его.
11. Не следует использовать для пипетирования шприцы с острыми иглами для подкожных инъекций. Такие иглы необходимо заменять тупоконечными канюлями.

Как избежать разбрызгивания инфекционного материала

1. Микробиологическая петля должна быть замкнута в непрерывное кольцо и иметь плечо длиной не более 6 см.
2. Там, где существует опасность попадания брызг инфекционного материала на бунзеновскую горелку, необходимо использовать микроустройства для прокаливания петель. Безопасной альтернативой является применение пластиковых петель одноразового использования.
3. Пробы на каталазу нельзя проводить на предметных стеклах. Необходимо использовать пробирочные методы или методы с применением покровных стекол в защитных боксах. Каталазные пробы удобно также проводить, касаясь поверхности, колонии гематологическим микрокалькулятором, наполненным перекисью водорода.
4. Использованные образцы и культуры необходимо держать в водонепроницаемых контейнерах для ликвидации.
5. По окончании любого исследования рабочую поверхность следует протереть соответствующим дезинфицирующим средством.
6. Боксы с горизонтально-проточной очисткой воздуха не являются биологически безопасными и не должны использоваться в качестве таковых.

Как пользоваться боксами биологической безопасности

1. Всем, кто будет работать в боксах, следует разъяснить порядок и ограничения применения боксов.
2. Боксом нельзя пользоваться, пока не включена вентиляционная система и его индикатор не установлен в позицию «безопасно».
3. Если бокс имеет стеклянный защитный экран, его не следует поднимать, пока не закончена работа.
4. Во время работы в боксе должен быть минимум материалов и приборов.
5. Не следует использовать в боксе бунзеновскую горелку. Источник тепла искажает расчетную конвекцию и подвергает фильтры риску загорания. Возможно использование микроустройств для прокаливания петель, однако пластиковые петли разового использования предпочтительнее.
6. Вся работа должна выполняться у задней стенки бокса и быть видимой снаружи сквозь стеклянные стенки.
7. Необходимо помнить, что бокс не предохраняет ни оператора, ни его самого в случае его неопытности или утечки материала.
8. Вентиляционная система бокса должна работать не менее 15 мин после полного завершения работы.

Как избежать попадания инфекционного материала в желудочно-кишечный тракт

1. Крупные частицы и капельки материала (>5 мкм), образующиеся во время микробиологических манипуляций, быстро оседают на открытых поверхностях тела и руках оператора. Руки необходимо часто мыть. Оператор не должен касаться руками рта и глаз.
2. В лаборатории нельзя хранить и принимать пищу и питьё.
3. В лаборатории не следует курить или жевать резинку.
4. В лаборатории не следует применять косметические средства.

Как избежать случайной инъекции инфекционного материала

1. Такие инъекции могут быть результатом неудачного обращения с иглами, пастеровскими пипетками и битым стеклом.
2. Риск таких случаев при работе с иглами может быть снижен при а) более внимательном обращении и б) как можно более редком использовании шприцев и игл. Во многих случаях шприцы и иглы можно успешно заменить пипетками. При необходимости использовать для измерения объемов шприц иглу надо заменить тупой канюлей.
3. Случайных инокуляции пастеровскими пипетками или битым стеклом можно избежать более осторожной работой.

Как получить сыворотку крови

К выполнению этой процедуры допускается только персонал лаборатории, прошедший детальный инструктаж.

1. Во избежание образования аэрозолей и выплескивания образцов необходимо, чтобы персонал имел хорошие навыки работы в соответствующих условиях.
2. Отработанные пипетки следует целиком погружать в раствор гипохлорита натрия или другого соответствующего дезинфектанта. Перед ликвидацией они должны оставаться в этом растворе по крайней мере в течение ночи.
3. Использованные пробирки из-под образцов, содержащие сгустки крови и т. п., необходимо помещать в соответствующие водонепроницаемые контейнеры (со смещаемыми крышками) для автоклавирования и/или сжигания.
4. Для вытирания пролитой крови или сыворотки необходимо иметь раствор гипохлорита натрия.

Как пользоваться центрифугой

Общие замечания

1. Техническая безопасность является необходимым условием микробиологической безопасности при использовании клинических лабораторных центрифуг.
2. При неправильном обращений с центрифугой могут образовываться взвешенные в воздухе инфекционные частицы. Эти частицы двигаются со скоростями, слишком высокими, чтобы
    обеспечить их улавливание, если центрифуга помещена в обычные боксы I и II класса.
3. Работа на центрифуге должна проводиться в соответствий с инструкциями изготовителя.
4. Грамотное обращение с центрифугами и герметизация центрифужных пробирок обеспечивают адекватную защиту от  микроорганизмов и агентов групп риска III и IV.
5. Внутреннюю поверхность центрифужной камеры следует ежедневно осматривать, чтобы вовремя обратить внимание на неправильную технику центрифугирования, следствием чего может быть появление пятен и грязи на уровне ротора, которые  необходимо отмыть.
6. Угловые насадки не следует использовать для микробиологических исследований, за исключением случаев применения I их в специальных высокоскоростных центрифугах. В обычных I угловых роторах часть жидкости все же вытекает (даже при закрытых пробирках) в силу геометрии машины.
7. За исключением ультрацентрифужных и малых протромбиновых пробирок уровень жидкости в обычной центрифужной пробирке должен быть ниже ее краев не менее чем на 2 см. Пробирки, содержащие инфекционный материал, должны быть закрыты крышками.

Центрифугирование микроорганизмов, агентов и материалов групп риска III и IV

В дополнение к упомянутым выше требованиям необходимо соблюдать следующие меры предосторожности.

1.  Центрифугирование должно проводиться партиями, отдельными от прочего материала.
2. Центрифужные пробирки или сосуды должны быть снабжены завинчивающимися крышками и маркированы с указанием принадлежности содержащегося в них материала к группам риска III или IV. 
3. Необходимо использовать центрифужные стаканы с герметично закрывающими их предохранительными крышками.
4. Роторы следует загружать, закрывать и открывать в боксах биологической безопасности.

Как применять гомогенизаторы и шейкеры

1. Крышки, чашки и сосуды должны быть прочными и не иметь трещин или других дефектов. Крышки должны быть хорошо пригнаны, а прокладки — в хорошем состоянии.
2. Шейкеры и гомогенизаторы могут давать утечку аэрозолей, содержащих инфекционные частицы, через щели между крышкой и сосудом. В процессе работы в сосуде создается давление. Рекомендуются тефлоновые гомогенизаторы поскольку стеклянные могут разбиться, что повлечет за собой вытекание инфекционного материала и ранение оператора.
3. Во время работы аппараты должны быть закрыты прозрачными пластиковыми экранами прочной конструкции. Их необходимо дезинфицировать после работы. По возможности с этими аппаратами надо работать в боксах биологической безопасности.
4. После перемешивания, культивирования в шейкере или гомогенизации все контейнеры открываются только в боксе биологической безопасности.
5. Внутреннюю поверхность центрифужной камеры следует ежедневно осматривать, чтобы вовремя обратить внимание на неправильную технику центрифугирования, следствием чего может быть появление пятен и грязи на уровне ротора, которые необходимо отмыть.
6. Угловые насадки не следует использовать для микробиологических исследований, за исключением случаев применения их в специальных высокоскоростных центрифугах. В обычных угловых роторах часть жидкости все же вытекает (даже при закрытых пробирках) в силу геометрии машины.
7. За исключением ультрацентрифужных и малых протромбиновых пробирок уровень жидкости в обычной центрифужной пробирке должен быть ниже ее краев не менее чем на 2 см. Пробирки, содержащие инфекционный материал, должны быть закрыты крышками.

Как использовать измельчители тканей (пробирки Гриффита, гриндеры Тенбрука)

1. Измельчители следует оборачивать адсорбирующим материалом и работать с ними в перчатках.
2. Работать с измельчителями следует в боксах биологической безопасности.

Как вскрывать ампулы, содержащие лиофилизированные инфекционные материалы

При вскрытии ампул с лиофилизированым материалом следует соблюдать осторожность, поскольку воздух, попадающий в ампулу, внутри которой поддерживался вакуум, может диспергировать ее содержимое в атмосферу. Ампулы открываются только в боксах биологической безопасности.

Рекомендуется следующая процедура вскрытия ампул:

1. Перед вскрытием необходимо деконтаминировать наружную поверхность ампулы.
2. Там, где находится ватная пробирка, прикрывающая ампулу, у середины пробки делают надпил.
3. Раскаленным докрасна стеклянным стержнем прикасаются к надпилу и вскрывают ампулу.
4. Верхушку осторожно снимают и обрабатывают как инфекционный материал.
5. Если над содержимым ампулы еще сохраняется ватная пробка, ее удаляют пинцетом.
6. Жидкость для ресуспендирования материала добавляют медленно, чтобы избежать вспенивания.

Как сохранять ампулы, содержащие инфекционный материал

Ампулы, содержащие инфекционный материал, никогда не погружают в жидкий азот, поскольку надтреснутые или плохо запаянные ампулы могут разрушиться или взорваться в момент извлечения. Если для хранения ампул требуется очень низкая температура, их можно погрузить в газовую фазу жидкого азота, т. е. поверх его жидкой фазы. Если позволяют условия, инфекционные агенты должны сохраняться в камерах глубокого холода или в сухом льду.

Наружная поверхность ампул, хранящихся таким образом, должна быть деконтаминирована по их извлечении.

Как обращаться и работать с морозильными камерами и холодильниками

1. Морозильные камеры, камеры глубокого холода и контейнеры с сухим льдом следует периодически проверять, очищать и освобождать от наледи, чтобы удалить поврежденные при хранении ампулы, пробирки и другие сосуды, содержащие опасный материал. Во время очистки следует надевать резиновые перчатки.
2. Все материалы, особенно инфекционные или токсичные, хранящиеся в морозильных камерах или камерах глубокого холода, должны быть снабжены этикетками с указанием научного названия материала, даты закладки на хранение и имени сотрудника, сохраняющего материал.
3. Не допускается хранение огнеопасных жидкостей в холодильниках, специально не предназначенных для этого.