Определение общего количества белка при помощи рефрактометра

Для определения белка и его фракций любым из приведенных ниже методов необходима сыворотка крови. Кровь берут из вены сухим шприцем или одной иглой (без отсасывания) в сухую пробирку в количестве 5–7 мл. После свертывания крови стенки пробирки обводят тонкой стеклянной палочкой для отделения от них образовавшегося сгустка. Затем пробирку с кровью центрифугируют. Сыворотку отсасывают пипеткой и переносят в чистую сухую пробирку.

Принцип метода

Принцип рефрактометрии заключается в определении коэффициента преломления сыворотки. Поскольку степень рефракции раствора обусловлена количеством находящихся в нем частиц, коэффициент преломления довольно точно свидетельствует о количественном содержании в нем белка. В тех случаях, когда в сыворотке слишком много холестерина или жиров, получается искажение истинного содержания белков в крови.

Аппаратура

1. Рефрактометр типа РЛУ.
2. Центрифуга электрическая.

Посуда

1. Пробирки центрифужные.
2. Пастеровские пипетки.

Реактивы

1. Дистиллированная вода.

Ход анализа

Перед началом работы с прибором, а в ответственных случаях перёд каждым определением проверяют нулевую “точку нанесением одной-двух капель дистиллированной воды на полированную поверхность измерительной призмы. Лупу шкалы и окуляр зрительной трубы устанавливают на резкость, так, чтобы четко были видны поле зрения и визирные линии. Дисперсию в окуляре зрительной трубы устраняют вращением рукоятки дисперсионного компенсатора.

Линию лупы шкалы устанавливают на делении 1,333. Если граница светотени проходит через точку пересечения визирных линий, то прибор установлен на нуль. Если этого нет, то при помощи ключа устанавливают границу светотени на точку пересечения визирных линий.

После проверки нулевой точки приподнимают верхнюю половину камеры и вытирают обе призмы фильтровальной бумагой, а затем досуха мягкой неворсистой салфеткой. Затем на поверхность призмы наносят одну-две капли сыворотки крови и быстро закрывают камеру. Зеркалом направляют свет в окно камеры и поворачивают камеру до тех пор, пока граница светотени не появится в поле зрения прибора. Вращением винта устраняют окрашенность поля и достигают резкой границы светотени, которую затем устанавливают на точке пересечения визирных линий. Затем по шкале с помощью лупы производят отсчет показаний преломления сыворотки.

Расчет

По величине коэффициента преломления в табл. 1 находят процентное содержание белка.
Например, показание рефрактометра 1,34910. По таблице находим, что этому показателю соответствует содержание белка, равное 7,63%.