Гельминтоовоскопия
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Баночки из-под мази объемом 50 мл.
- Проволочные петли.
- Лопаточки для снятия примесей.
- Деревянные палочки.
- Глазные пипетки.
- Стеклянные палочки с оплавленными концами.
- Предметные и покровные стекла.
- Микроскопы.
- Поваренная соль.
- Азотнокислый натрий.
- Едкий натр.
- Глицерин.
- Дистиллированная вода.
- Дезинфицирующие растворы.
Согласно инструкции Министерства здравоохранения СССР, клинико-диагностические лаборатории с целью диагностики гельминтов исследуют кал методом нативного мазка и методом Фюллеборна.
Приготовление препаратов для диагностики гельминтов
1. Метод нативного мазка
Комочек кала, взятый из разных мест спичкой или деревянной палочкой, помещают на предметное стекло и тщательно растирают в капле 50% раствора глицерина, воды или физиологического раствора. Полученный препарат накрывают покровным стеклом, слегка надавливают и исследуют под микроскопом.
2. Метод Фюллеборна
Для приготовления препаратов необходимы следующие реактивы:
- Насыщенный раствор поваренной соли: 400 г NaCl растворяют при нагревании в 1 л воды, охлаждают и фильтруют.
- Насыщенный раствор азотнокислого натрия: азотнокислый натрий (NaNOa) растворяют в воде до насыщения, раствор кипятят до появления пленки и дают ему остыть.
Ход исследования. К 3-5 частям кала, помещенным в баночку объемом 50 мл, приливают постепенно при постоянном помешивании деревянной палочкой 20 частей насыщенного раствора поваренной соли. Крупные частицы, всплывшие на поверхность, удаляют бумажным или картонным совком. Смесь оставляют на 1-1,5 часа. Яйца глистов в зависимости от удельного веса либо располагаются на поверхности жидкости, либо оседают на дно (яйца сосальщиков, бычьего, свиного солитера, неоплодотворенные яйца аскарид). Поверхностную пленку снимают с помощью проволочной петли (диаметр 1 см) и помещают на предметное стекло.
Повторными манипуляциями снимают всю поверхностную пленку. Во избежание высыхания пленки рекомендуют стряхивать ее в капли глицерина. Затем жидкость из баночки сливают, а из остающегося осадка глазной пипеткой или петлей переносят несколько капель в глицерин, нанесенный на предметное стекло; капли накрывают покровными стеклами. Для большей концентрации яиц гельминтов 1-2 капли смешанных в равных объемах зеленого мыла и этилового спирта приливают на поверхность кала, обработанного по методу Фюллеборна. Образующаяся мыльная пленка сдвигает всплывшие яйца гельминтов к одной стороне на поверхности жидкости. Затем пленку снимают петлей и переносят на предметное стекло. Петлю прожигают, а препарат микроскопируют.
Метод Калантарян (технически выполняется, как метод Фюллеборна). Для обработки кала используют насыщенный раствор азотнокислого натрия (удельный вес 1,4). Этот метод дает больший процент обнаружения яиц глистов.
3. Соскоб с перианальных складок (специальный метод исследования для обнаружения яиц остриц)
Соскоб рекомендуют производить рано утром или поздно вечером Концом спички, отточенной в виде шпателя и смоченной в 50% растворе глицерина или 1% растворе щелочи, делают соскоб с перианальных складок в окружности заднепроходного отверстия (ануса), затем материал тщательно соскабливают со спинки краем покровного стекла на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина или 1% раствора щелочи и накрывают ее тем же покровным стеклом. Спичку сжигают. Этот метод требует повторного троекратного исследования.
С этой же целью применяют целлофановый метод. Клейкой поверхностью целлюлозной ленты, укрепленной на стеклянной палочке или деревянном шпателе, прикасаются к коже перианальных складок. Затем целлюлозную ленту помещают клейкой стороной вниз на предметное стекло и подвергают исследованию.
Приготовленный препарат помещают на предметный столик микроскопа. Изучение препарата производят вначале под малым увеличением, полностью в пределах покровного стекла. В некоторых случаях диафрагму сужают, чтобы не пропустить яиц с тонкой бесцветной оболочкой. С целью уточнения принадлежности яйца к тому или другому виду гельминта препарат изучают при большом увеличении.
Морфология яиц гельминтов
Все данные яйца показаны на рисунках 24 (картинки кликабельны).
Яйцо ocтрицы неправильной яйцевидной формы, оболочка тонкая, гладкая, бесцветная, одна сторона яйца уплощена, другая — выпукла. Внутри яйца зародыш на разной стадии развития. Размеры 50-60 X 20-30.
Яйца аскариды: а) Оплодотворенное яйцо овальной (реже шаровидной) формы, оболочка толстая многослойная, наружная белковая оболочка крупнобугристая, бесцветная, окрашивается в темно-желтый или желто-бурый цвет пигментами кала. Внутри яйца мелкозернистый шаровидный бластомер. Размеры 50-70 X 40-50. б) Неоплодотворенное яйцо удлиненной, всегда неправильной формы, белковая оболочка тонкая, мелкобугристая, желтоватого цвета. Содержимое яйца заполнено крупными желточными шарами. Размеры 50-106 X 40-50. Реже яйца аскариды бывают лишены белковой оболочки, прозрачны, бесцветны или серо-зеленого цвета, покрыты ровной и тонкой оболочкой.
Яйцо власоглава имеет форму лимона, бочонка, оболочка толстая, многослойная, золотисто-желтого или коричневого цвета, на полюсах вздутия. Внутри яйца мелкозернистое содержимое. Размеры 50-54 X 22-23.
Яйцо анкилостомы (кривоголовка) правильной овальной формы, оболочка тонкая, прозрачная, бесцветная, в свежеотложенных яйцах по четыре бластомера. Размеры 54-70 X 36-40.
Яйца (онкосферы) бычьего и свиного цепня шаровидной формы. Онкосфера (зародыш) с толстой, радиальной исчерченной оболочкой темно-коричневого цвета с шестью эмбриональными крючьями. Размеры 31 X 40.
Яйца карликового цепня овальной формы, оболочка бесцветная с онкосферой внутри, в онкосфере шесть зародышевых крючьев. Размеры 40 X 50.
Яйцо широкого лентеца яйцевидной формы, оболочка толстая, гладкая, серого или темно-бурого цвета. Внутри яйца крупная зернистость, на верхнем полюсе крышечка, на противоположном полюсе бугорок (утолщение оболочки). Размеры 68-71 X 45. Иногда (при обработке кала глицерином или при подсыхании материала) яйца принимают форму «лодочки».
Яйцо печеночной двуустки яйцевидной формы, оболочка топкая, гладкая, желтого цвета, на верхнем полюсе крышечка. Внутри яйца желточные шары. Размеры 130-145 X 70-90.
Яйцо сибирской двуустки яйцевидной формы, оболочка тонкая, гладкая, бледно-желтого цвета, на верхнем полюсе яйца крышечка, на противоположном — ши пик, нижняя половина яйца расширена. Внутри яйца мелкая зернистость. Размеры 26-32.
