Определение белка в моче

В моче в норме содержатся ничтожно малые количества сывороточного альбумина и муцина, которые не обнаруживаются с помощью обычных качественны проб на белок. При некоторых заболеваниях в моче появляется заметное количество белков (сывороточного альбумина и сывороточного глобулина) – от долей грамма до 25 г в сутки.

Для обнаружения в моче белков обычно применяют три реакции, основанные на их способности денатурироваться и выпадать в осадок: 1) проба с кипячением; 2) осаждение крепкой азотной кислотой и 3) осаждение сульфосалициловой кислотой.

Проба с кипячением

Принцип реакции основан на осаждении белков при кипячении. Присутствие солей и концентрация водородных ионов играют при этом важную роль. В сильнокислых и щелочных растворах белки обычно не выпадают при нагревании. В сильно кислых растворах белки при нагревании могут коагулировать лишь при добавлении достаточного количества какой-либо нейтральной соли.

Посуда

1. Пробирки химические.
2. Стеклянная воронка.
3. Пипетки на 1 и 5 мл.

Реактивы

1. 2% раствор уксусной кислоты.
2. Насыщенный раствор хлористого натрия.

Ход анализа

В пробирку наливают 2–3 мл профильтрованной исследуемой мочи. Если моча щелочная, то ее предварительно подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции на лакмус.

Добавляют 0,5–1 мл раствора хлористого натрия и нагревают верхнюю часть пробирки. Как только верхний слой жидкости начнет кипеть, нагревание прекращают и добавляют 2–3 капли раствора уксусной кислоты. Появление осадка, не растворяющегося при прибавлении кислоты, указывает на присутствие в исследуемой моче белка.

При кипячении мочи, даже имеющей слабокислую реакцию, может выпасть осадок фосфорнокислых или углекислых солей щелочноземельных металлов. Эти осадки в отличие от белка растворимы при добавлении уксусной кислоты.

Проба с концентрированной азотной кислотой

Принцип реакции заключается в том, что концентрированные минеральные кислоты (кроме ортофосфорной кислоты) вызывают необратимое осаждение белков из растворов. Избыток минеральной кислоты, за исключением азотной, растворяет выпавший осадок белка

Посуда

1. Пробирки химические.
2. Пипетки на 1 и 5 мл.

Реактив

Концентрированная азотная кислота.

Ход анализа

В пробирку наливают 1–2 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно наслаивают на кислоту 1–2 мл профильтрованной исследуемой мочи. При наличии белка на самой границе двух жидкостей появляется мутное белое кольцо. Если белка в моче мало, то кольцо образуется не сразу, а через 2–4 минуты. Эта проба более чувствительна, чем проба кипячением, и открывает до 0,0033 % белка.

От изменения мочевых или желчных пигментов под влиянием азотной кислоты на границе могут появиться цветные, но прозрачные кольца. Моча, богатая солями мочевой кислоты, дает кольцо, которое получается несколько выше границы двух жидкостей. Моча, богатая мочевиной, может дать осадок, состоящий из плохо растворимой азотнокислой мочевины. Такое кольцо имеет кристаллический вид, кольцо же белка аморфно. Если при повторении реакции мочу предварительно развести водой, то кольца от мочевины не получится. Слабо заметная муть может появиться от осаждения тлуцина мочи. Такая муть располагается выше границы двух жидкостей и не так резко отграничена.

Проба с сульфосалициловой кислотой

Принцип реакции основан на том, что белки из растворов могут осаждаться и органическими кислотами. Сульфосалициловая кислота является очень чувствительным и специфическим реактивом на белок.

Посуда

Та же, что и в предыдущем методе.

Реактив

20% раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход анализа

В пробирку наливают 2–3 мл прозрачной слабокислой или кислой мочи и добавляют 5–6 капель раствора сульфосалициловой кислоты. Появление осадка или мути указывает на присутствие белка.

Проба с сульфосалициловой кислотой является наиболее чувствительной реакцией й открывает белок при содержании его до 0,0015% в моче.

Количественное определение белка в моче (по Брандбергу– Стольникову)

Принцип метода

Метод основан на появлении отчетливо видимого кольца при наслаивании азотной кислоты на мочу. Эмпирически найдено, что при незначительном содержании белка в растворе кольцо образуется не сразу после наслаивания, а спустя некоторое время. При содержании 0,0033% белка кольцо получается через 3 минуты. Мочу последовательно разводят дистиллированной водой и при этом отыскивают ту порцию, в которой кольцо появляется через 3 минуты.

Посуда

1. Химические пробирки.
2. Пипетки на 5 и 10 мл.

Реактив

Азотная кислота концентрированная (удельный вес 1,2–1,4).

Ход анализа

В ряд пробирок наливают по 2–3 мл концентрированной азотной кислоты. При этом необходимо стремиться не смачивать Стенки пробирки кислотой. Профильтрованную мочу разводят в 10 раз, т. е. объем мочи смешивают с 9 объемами воды. Разбавленную мочу при помощи пипетки осторожно по стенке пробирки наслаивают на азотную кислоту. При этом возможны три варианта:

• кольцо из белка получается ровно через 3 минуты и количество белка в исходном растворе = 0,0033Х 10 = 0,33%;
• кольцо появляется ранее 3 минут; в этом случае в ряд пробирок наливают по 10 мл воды и приливают в первую 1 мл разведенной в 10 раз мочи, во вторую – 2 мл, в третью – 3 мл и т. д. В каждую пробирку наслаивают азотную кислоту;
• при первом разведении мочи в 10 раз смесь не дает кольца через 3 минуты, таким образом, белка в исследуемой моче меньше 0,033%; поэтому исходную мочу заново разводят в 5–8 раз, а в остальном поступают, как было указано выше.