Определение кровяного пигмента в моче
Оснащение рабочего места
При данном виде анализа мочи рабочее место должно быть оснащено следующими элементами:
- Пробирки.
- Пипетки.
- Капельницы.
- Гваяковая смола.
- Бензидин.
- Пирамидон.
- Ледяная уксусная кислота.
- Эфир.
- 96° спирт.
- Пергидроль.
Методика определения кровяного пигмента в моче
Данная методика основана на следующем принципе: гемоглобин обладает свойством отнимать кислород от пероксидных соединений и отдавать его другим веществам (гваяковой смоле, бензидину, пирамидону); в результате этого образуются красящие вещества. Так, при реакции с бензидином получают зеленое или синее окрашивание, с гваяковой смолой — синее, с пирамидоном — фиолетовое.
При определении кровяного пигмента в моче придерживаются следующих правил:
1. Исследование производят в свежеполученной и хорошо взболтанной моче, в абсолютно чистой посуде. В постоявшей моче гемоглобин превращается в метгемоглобин, не обладающий пероксидазными свойствами, что может послужить причиной отрицательных результатов исследования.
2. Для реакции используют химически чистые и не вышедшие из срока годности реактивы.
3. Концентрируют гемоглобин и освобождают мочу от некоторых сопутствующих веществ (миогемоглобин, хром, медь, йодистый калий, бромистый калий и др.), дающих аналогичный результат реакции. Для этого готовят уксусно-эфирную вытяжку. С этой целью в химическую пробирку наливают 8-10 мл хорошо взболтанной нефильтрованной мочи (если не соблюдать этих указаний, то можно получить отрицательные результаты), 2 мл ледяной уксусной кислоты и 4-5 мл эфира; содержимое пробирки встряхивают и оставляют в штативе на несколько минут для отделения уксусно-эфирной вытяжки, в которую переходит гемоглобин в виде гематина. Верхний слой (уксусно-эфирная вытяжка) используют для проведения реакции.
4. Готовят 3% раствор перекиси водорода из свежего пергидроля : к 3 частям пергидроля прибавляют 27 частей дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
Кровяной пигмент выявляют следующими реакциями:
- реакцией с гваяковой смолой;
- реакцией с бензидином;
- реакцией с пирамидоном.
Рассмотрим данные виды реакций более подробно
Реакция с гваяковой смолой
Для постановки этой реакции применяют свежеприготовленный насыщенный раствор гваяковой смолы. В пробирку помещают щепотку (на кончике ножа) гваяковой смолы и приливают 2-4 мл 96° спирта, растворяют до цвета крепкого чая. В реакции используют раствор без осадка.
Постановка реакции. В отдельную пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки и прибавляют 8-10 капель свежеприготовленного насыщенного спиртового раствора гваяковой смолы и 8-10 капель 3% перекиси водорода.
При наличии кровяного пигмента образуется синее окрашивание. При незначительном содержании кровяного пигмента соответствующее окрашивание может появиться не сразу, а через несколько минут после начала реакции.
Реакция с бензидином
Для постановки реакции применяют 5% раствор бензидина в ледяной уксусной кислоте. Реактив готовят следующим образом: 0,5 г химически чистого беизидииа помещают в цилиндр и доливают до 10 мл ледяной ускусной кислотой. Приготовленный реактив должен быть бесцветным.
Постановка реакции. В пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки, после чего прибавляют 8-10 капель 5% раствора бензидина и 8-10 капель 3% перекиси водорода.
При наличии кровяного пигмента образуется зеленое окрашивание.
Реакция с пирамидоном
Для реакции в качестве реактива применяют 5% раствор пирамидона: 0,5 г пирамидона помещают в цилиндр и доливают до 10 мл 96° спиртом.
Постановка реакции. В пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки, прибавляют 8-10 капель 5% спиртового раствора пирамидона и 8-10 капель 3% перекиси водорода.
При наличии кровяного пигмента образуется фиолетовое окрашивание.
В случае выявления кровяного пигмента в бланке анализа указывают: «кровяной пигмент обнаружен».
