Реакция Григорьева-Раппопорта
Оснащение рабочего места
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Штатив с пробирками.
- Сыворотки крови больных.
- Физиологический раствор.
- Антигены для реакции Григорьева-Раппопорта.
- Градуированные пипетки.
- Микропипетки.
- Бланки для записи анализов.
Кроме классической реакции Вассермана, для лабораторной диагностики сифилиса ставится еще реакция Григорьева-Раппопорта с непрогретой (активной) сывороткой больного человека, сохраняющей свою комплементарную активность. Для активных реакций необходимо пользоваться свежей сывороткой, полученной из крови больного не позже чем за 8 часов и не раньше чем за 36 часов до постановки опыта.
Постановка реакции Григорьева-Раппопорта
Реакцию Григорьева-Раппопорта ставят с двумя антигенами. На каждую исследуемую активную сыворотку берут по три нумерованные пробирки и в каждую пробирку отмеривают по 0,2 мл исследуемой сыворотки. Затем в пробирки № 1 и 2 добавляют по 0,5 мл, а в пробирку № 3 — 0,8 мл физиологического раствора, после чего в пробирку № 1 доливают 0,3 мл антигена № 1, а в пробирку № 2 — 0,3 мл антигена № 2, разведенных по титру. Пробирка № 3 является контрольной, так как она не содержит антигена.
Пробирки встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 25 минут, периодически встряхивая их по 15-20 секунд. Затем в каждую из них добавляют по 1 мл гемолитической системы, хорошо взбалтывают и снова оставляют при комнатной температуре на 25 минут. Гемолитическая система состоит из гемолитической сыворотки, которую используют в более высоком титре (так, например, если титр гемолитической сыворотки 1: 1200, то ее разводят в соотношении 1 : 300), и дефибринированной, неотмытой, профильтрованной через два слоя марли крови барана. Кровь барана разводят следующим образом; к 1 мл дефибринироваиной крови добавляют 23 мл физиологического раствора и 1 мл фиксатора. Фиксатор готовят так: к 400 мл дистиллированной воды добавляют 0,5 г сернокислого цинка, 1 мл формалина и 3,6 г хлористого натрия.
Учет реакции производят немедленно по окончании опыта, основываясь на показаниях пробирок № 1 и 2, содержащих антиген. Положительный результат ( + ) характеризуется полной задержкой гемолиза, а отрицательный (—) — наличием полного гемолиза. В контрольных пробирках должен быть полный гемолиз (табл. 7).
