Химическое исследование ликвора

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Пробирки.
2. Пипетки.
3. Шпатели и иглы.
4. Предметные стекла.
5. Центрифуга.
6. Газовая или спиртовая горелка.
7. 50% азотная кислота.
8. Сернокислый аммоний.
9. Карболовая кислота.
10. Хлорное железо.
11. Лимоннокислый натрий.
12. Поваренная соль.
13. Сулема (HgCl2) в разведении 1 : 1000.
14. Набор для окраски по Цилю-Нильсену и Граму. Компаратор.

Определение сывороточного белка в ликворе

Общее количество белка в ликворе определяют так же, как в моче; расчет результатов производят, умножая 0,033% на степень разведения ликвора либо используя таблицу. Нормальное содержание белка 0,15-0,3%.

Если полученный ликвор содержит примесь крови, то количество белка увеличивается за счет белков крови и тогда необходимо определять «собственный белок» ликвора.

Определение «собственного белка» спинномозговой жидкости по методу А. Ц. Возной

Две пробирки одинакового диаметра ставят в компаратор. В одну из них помещают исследуемый ликвор, а в другую — физиологический раствор. В пробирку с физиологическим раствором добавляют по каплям кровь, взятую из пальца, до получения одинаковой окраски с исследуемым ликвором.

Содержимое обеих пробирок взбалтывают, а затем центрифугируют в течение 10-15 минут. Для определения белка используют прозрачный бесцветный центрифугат из обеих пробирок. Количество белка определяют при помощи способа, видоизмененного С. Л. Эрлихом и А. Я. Альтгаузеном, так же, как в моче (см. тему «Количественное определение белка в моче»). Так как примесь крови в ликворе увеличивает содержание в нем белка, то расчет количества собственного белка кровянистого ликвора ведут путем вычитания количества белка разведенной крови из количества белка кровянисто окрашенной спинномозговой жидкости. Результат представляет собой собственный белок ликвора.

При желтоватой окраске ликвора поступают так: в пробирку с кровью больного, взятой из пальца и смешанной с физиологическим раствором, вносят стеклянную палочку, смоченную насыщенным раствором двухромовокислого капля, при этом жидкость приобретает оттенок, весьма приближающийся к цвету исследуемого ликвора. Разницу в цвете обеих пробирок выравнивают в компараторе, прибавляя физиологический раствор к пробирке, содержащей кровь. Содержимое пробирок используют для определения белка. Расчет количества собственного белка ликвора производят аналогично описанному выше.

Определение «собственного белка» спинномозговой жидкости по методу Панди

Реактив для этой реакции готовят следующим образом. На технических весах взвешивают 80-100 г карболовой кислоты; приготовленную навеску растворяют в 1 л дистиллированной воды, тщательно размешивают, выдерживают в термостате при температуре 37° в течение 24 часов и периодически взбалтывают, затем раствор выдерживают еще 2-3 суток при комнатной температуре. Реактивом служит прозрачная надосадочная жидкость.

Постановка реакции Панди. Реакцию ставят на предметном, часовом стекле или в пробирке. Результаты ее учитывают через 3 минуты на черном фоне.

На предметном стекле реакция ставится таким образом. Две-три капли реактива Панди помещают на предметное (или часовое) стекло, установленное на черном фоне, и к ним приливают 1-2 капли исследуемого ликвора. Реакцию считают положительной, если через 3 минуты возникает помутнение жидкости. В зависимости от степени помутнения реакцию учитывают следующим образом: ( + ) — едва уловимое помутнение, возникающее между двумя жидкостями; (+ +) — тонкая беловатая полоска; ( + + +) — ясное интенсивное помутнение; ( + + + +) — интенсивная мутность даже с выпадением хлопьев. В пробирке реакцию ставят так: к 0,5 мл реактива Панди, помещенного в узкой пробирке, добавляют одну каплю исследуемого ликвора. Учет реакции производят так же, как указано выше.

Между количеством белка и степенью помутнения установлена прямая пропорциональная зависимость. На основании этого разработана методика разведения ликвора для последующего определения в нем количества белка.

Так, если реакция Панди положительная на ( + ), то ликвор разводят 10-15 раз, при ( + + ) — в 15-25 раз, при ( + + + ) — в 25-30 раз, при ( + + + + ) — в 35-70 раз. При появлении интенсивной мути и плотных белых хлопьев по всему реактиву разводят ликвор в 70-100 раз и более. При отрицательной реакции Панди на 50% азотную кислоту наслаивают неразведенный ликвор.

Определение глобулинов в ликворе

Глобулиновая реакция Нонне-Апельта основана на осаждении глобулинов равным количеством насыщенного раствора сернокислого аммония. Для этой реакции готовят насыщенный раствор NH4SO4: 850 г химически чистого сернокислого аммония растворяют в 1 л горячей дистиллированной воды. Раствор подогревают до кипения, взбалтывают до полного растворения, оставляют стоять на несколько дней при комнатной температуре, а затем фильтруют. рН раствора должен быть 7-7,1.

Постановка реакции. В пробирку наливают 0,5-1 мл реактива и на него наслаивают равное количество ликвора. На 3-й минуте учитывают результаты, отмечают толщину кольца на границе жидкостей и интенсивность мути после встряхивания пробирки. Реакцию учитывают на черном фоне. Едва заметное кольцо и слабую опалесценцию обозначают одним плюсом ( + ), ясное кольцо и ясную опалесцепцию — двумя плюсами (+ +), плотное кольцо и среднее помутнение — тремя плюсами ( + + +), плотное кольцо и сильное помутнение — четырьмя плюсами (+ + + +).

Реакция Вейхбродта

Реакция основана на осаждении глобулинов сулемой (HgCb) в разведении 1: 1000 (реактив Вейхбродта).

Постановка реакции. Ликвор в количестве 0,7 мл помещают в видалевскую пробирку, сюда же приливают 0,3 мл реактива Вейхбродта. Содержимое пробирок встряхивают и тотчас же учитывают результат на черном фоне. В положительных случаях появляется помутнение различной степени, которое учитывается так же, как при реакции Нонне-Апельта. Обычно эта реакция выражена слабее, чем реакция Нонне-Апельта.