Системы липопротеинов
К настоящему времени выделены и достаточно изучены три липопротеиновые системы Ag, Lp и Ld, из которых наибольший интерес для судебно-медицинских экспертов представляет, безусловно, система Ag, достоверно демонстрирующая независимый от других изосерологических и сывороточных систем крови человека генетически обусловленный аллотипический полиморфизм Р-липопротеинов.
Система Ag
Система Ag была открыта в 1961 г., когда А. С. Allison и В. S. Blumberg обнаружили в сыворотке крови пациента перенесшего многократные переливания крови, необычное преципитирующее изоиммунное антитело, которое являлось изопреципитином. Это антитело в агаровогелевом двойном диффузионном тесте по Оухтерлони реагировало приблизительно с 58% образцов сывороток крови белых американцев, открывая в них какой-то новый, не связанный ни с одной из известных сывороточных систем генетически обусловленный полиморфизм. Нормальные сыворотки, дающие положительный результат реакции преципитации с этим необычным изопреципитином, стали обозначать Ag(a), т. е. Содержащие, как ошибочно считали ранее, а-глобулиновый антиген. Изопреципитиновые антитела соответственно получили обозначение анти-Ag(a).
В. S. Blumberg (1962) установил липидную природу антигена Ag(а) и дифференцировал его как р-липопротеин низкой плотности, поскольку преципитаты, образующиеся в тесте Ouchterlony под воздействием изопреципи- тина aHTH-Ag(a), не окрашивались амидошварцем, но хорошо окрашивались специфичными для липидов красителями (судановым, шарлах красным). Первые же семейные обследования показали, что антиген Ag(a) является аутосомальным генетически обусловленным признаком, передающимся по наследству. В дальнейшем в сыворотках крови больных, подвергавшихся многократным гемотрансфузиям, обнаружили новые изопреципитины по отношению к p-липопротеинам, однако с новой [по сравнению с первоначальной у анти-Ag (а)] серологической направленностью [Blumberg В. S., Biddell N. М., 1963, и др.]. Оказалось, что антитело анти-Ag (а) состоит из смеси нескольких антител: aHTH-Ag(ai), aHTH-Ag(x) и анти-Ag (z). В дальнейшем были идентифицированы и другие антигенные детерминанты системы Ag, обозначенные антигенами Ag(y) и Ag(t).
Большим вкладом в раскрытие генетических взаимосвязей сывороточной липопротеиновой системы Ag, а также в открытие новых антигенов этой системы явилась разработка весьма чувствительного серологического метода пассивной гемагглютинации, который во многих случаях пришел на смену методу иммунной диффузии в агаровом геле по Оухтерлони.
Эритроциты крови человека группы ORh0 при 0°С и ультрацентрифугировании сенсибилизировали в присутствии бисдиазо- тированного бензидина очищенными Р-липопротеинами со специфичностью Ag(a-f-) и Ag(a–). Для проведения теста гемагглюти- нации, играющей в данном случае роль поискового теста на соответствующие антитела анти-Ag, сенсибилизированные эритроциты инкубировали с исследуемыми сыворотками 30 мин при 56°С. Антигены системы Ag выявляли (по аналогии с обнаружением групповых факторов системы Gm методом задержки гемагглютинации, вводя в реакцию сначала соответствующую сыворотку анти-Ag и испытуемую сыворотку и затем добавляя в эту смесь сенсибилизированные липопротеинами эритроциты.
R. Butler и Е. Brunner (1969) с помощью открытой ими сыворотки, названной анти-Ag (с), смогли показать, что в природе существуют не только изопреципитины анти-Ag, но и другие, непреципитирующие антитела анти-Ag, проявляющие свою серологическую активность не в иммунодиффузионном тесте по Оухтерлони, а только в тесте пассивной гемагглютинации и подобных серологических реакциях.
К настоящему времени, кроме указанных выше 5 факторов, описаны следующие факторы системы Ag: Ag(c), Ag(m), Ag(g), Ag(d) и Ag(h).
Сформированность липопротеиновой системы Ag к моменту рождения ребенка позволяет использовать ее генетически обусловленный полиморфизм в судебно-медицинских экспертизах спорного отцовства уже на ранних сроках жизни ребенка. Пока еще до конца не выяснены все генетические взаимосвязи этой, по-видимому, очень сложной липопротеиновой системы. Однако многочисленные семейные обследования наследственной передачи групповых антигенов системы Ag свидетельствуют о том, что все дети, родители которых не имели какого-либо антигена этой системы, также не содержали его в сыворотке крови. Поэтому совершенно оправдано использование этой генетически полиморфной сывороточной системы в экспертизах, проводимых по делам о спорном происхождении ребенка.
Фамильные исследования показали также, что антигенный полиморфизм системы Ag управляется кодоминантными аутосомальными генами. Еще неясно, расположены ли все эти гены в одном, едином генном локусе для данной системы или же они находятся в разных, но тесно сцепленных генных локусах. Предполагают, что антиген Ag (у) является генетическим продуктом гена, аллельного по отношению к гену, контролирующему реализацию антигена Ag(x). Это предположение полностью подтвердилось исследованиями J. Hirschfeld и соавт. (1968).
Кроме первой аллельной пары, или двух аллельных генов Ag* и Agy, были найдены и другие парные аллели в системе Ag. Все это позволило создать современную генетическую концепцию наследования групповых антигенов системы Ag, согласно которой на соответствующих аутосомальных хромосомах располагаются следующие четыре исключительно тесно сцепленные генные локусы системы Ag: Aga,/d, Agx/y, Agc/g и Agt/Z. Их аллели благодаря тесному сцеплению генных локусов наследуются, по-видимому, гаплотипично, наподобие аллелям генетических систем MNSs, Rh, Gm и HLA.
Частота встречаемости парных аллелей системы Ag вычислена в выборках населения Швейцарии и составила: для Agx = 20,8%, Ag1 =81,2%, Ag* = 51,4%, Agy=79,2%, Agg=70,3% и Agz= 18,8%.
Комплексная система Ag с ее богатым генетически детерминированным «парноаллельным» полиморфизмом нескольких тесно сцепленных друг с другом генных локусов, вне всякого сомнения, в недалеком будущем станет одной из самых перспективных сывороточных систем (наряду с системами Gm, Gc и Нр), используемых в судебно-медицинских экспертизах спорного отцовства.
В настоящее время из-за трудности получения антисывороток на многие антигены системы Ag и относительной легкости получения изоиммунных сывороток анти-Ag (х) и анти-Ag(y) последние два антигена уже применяются в экспертизах спорного происхождения ребенка. Так, по данным J. Hirschfeld и соавт. (1968), при использовании в таких экспертизах только одного фактора Ag(x) вероятность исключения мужчин, не являющихся биологическими отцами конкретных детей, составляет 8,15%. Если же в сыворотке крови проходящих по делу лиц выявлять не один фактор Ag(x), а и второй антитетический к нему фактор Ag(y), то вероятность исключения мужчин, ложно указанных в качестве отцов, повысится почти в 2 раза и достигнет величины 14,2%. Антигены Ag(x) и Ag(y) были исследованы этими авторами в 293 экспертизах спорного отцовства с привлечением по делу 332 мужчин, фигурирующих в качестве предполагаемых отцов; 18 из них были исключены как возможные отцы благодаря совместному выявлению в сыворотке крови проходящих по делу лиц указанных антигенов.
Разница в процентных показателях исключения заведомых «неотцов» по одному антигену Ag(x) или по двум антигенам Ag(x) и Ag(y) отражает качественно новый уровень проведения экспертиз спорного отцовства, при котором решающее значение для решения вопроса о возможности или невозможности рождения ребенка от определенной родительской пары играют не отдельные групповые факторы крови, а их гаплотипический и генотипический набор.
Благодаря знаниям генетических взаимосвязей системы Ag и ее «парноаллельного» полиморфизма эксперт должен выявлять не отдельные факторы этой системы, а устанавливать уже генотипические комбинации, в результате чего эффективность экспертизы спорного отцовства значительно повышается.
Действительно, второй тесно сцепленный с тремя другими генными локусами системы Ag локус Agxy является двуаллелъной генетической системой с тремя ее возможными генотипами: двумя гомозиготными Agx/Agx и Agy/Agy и одним гетерозиготным Agx/Agy. При исследовании одной сывороткой анти-Ag (х) эксперт может разделить всех людей на двя фенотипа Ag(x-f-) и Ag(x ). Причем если фенотипу Ag(x–) соответствует единственно возможный генотип Agy/Agy, то фенотипу Ag(x+) – два возможных генотипа Ag'x/AgK и Agx/Agy. При использовании одной сыворотки анти-Ag(x) при фенотипе Ag(x-J-) у ребенка, его матери и ответчика отцовство последнего в отношении данного ребенка не может быть исключено, поскольку в этом случае эксперт не знает истинного генотипа ни у одного из проходящих по делу лиц. При параллельном же исследовании сыворотками анти-Ag (х) и анти-Ag(y), открывающими соответствующие антигены, которые являются генетическими продуктами двух антитетических аллельных генов изолированной двуаллелъной генетической системы, эксперт точно знает генотипы матери, ребенка и ответчика. При этом возникает возможность исключения ответчика, не являющегося фактическим отцом ребенка, при генотипе Agx/Agx у него самого и матери ребенка и генотипе Agx/Agy у ребенка.
Таким образом, используя полиморфизм липопротеиновой системы Ag в экспертизах спорного отцовства, более эффективны «парные» антитела анти-Ag, которые выявляют антигены, реализующиеся под действием аллелле четырех тесно сцепленных локусов этой системы: анти-Ag(ai) и анти-Ag (d); анти-Ag (х) и анти-Ag (у); анти-Ag(c) и анти-Ag (g); анти-Ag(t) и анти-Ag(z). С помощью набора перечисленных выше сывороток анти-Ag можно устанавливать точные генотипы по каждой из четырех двуаллельных аутосомольных и кодоминантных систем внутри единой системы Ag.
Учитывая исключительно благоприятную частоту распространения парных аллелей внутри каждого из четырех тесно сцепленных генных локусов этой системы (особенно внутри генного локуса Aga rd ), можно утверждать, что суммарная вероятность исключения отцовства с учетом генотипов всех четырех генных локусов Ag будет исключительно высокой и составит приблизительно 55–60%.
Система Ld
Новая система липопротеинов, названная системой Ld, была открыта К. Berg в 1965 г. В сыворотке крови больного гемофилией мальчика, получавшего многократные гемотрансфузии, обнаружен необычный холодовой изопреципитин, который в иммунодиффузионном тесте по Оухтерлони реагировал приблизительно с 42% сывороток крови от 162 здоровых, не связанных родством жителей Осло. Открываемый этим Холодовым изопреципитином фактор являлся p-липопротеином и был назван фактором Ld(a). Семейные обследования показали наследственную передачу этого фактора, что свидетельствовало о его генетической обусловленности. Порядок наследования антигена Ld(a) показался аутосомально-доминантным.
Поскольку никакая корреляция между антигеном Ld(a) и другими липопротеиновыми системами (Ag и Lp) не прослеживалась, речь шла о новой генетически обусловленной липопротеиновой системе. Согласно генетической гипотезе наследования антигенов системы Ld, антиген Ld(a) генетически реализуется под действием доминантного аллеля Lda, причем в генном локусе системы Ld присутствует, по-видимому, и рецессивный аллель Ld, генетически не реализующий появления антигена Ld(a). Характер наследования антигена Ld(a) был изучен при исследовании 26 «критических» семей с 112 детьми, в которых родители имели фенотип Ld(a–); все дети в этих семьях также имели фенотип Ld(a–).
Фактор Ld(a) системы Ld у населения Земного шара распределяется неравномерно (табл. 17).
Таблица 17. Частота встречаемости фенотипов системы Ld у разных народов (по Berg К., 1965)
Как видно из табл. 17, частота встречаемости аллелей Ldа и гипотетического антитетического по отношению к нему аллеля Ld довольно благоприятна в плане использования системы Ld в судебно-медицинской экспертизе спорного отцовства. Однако при использовании только сыворотки анти-Ld (а) эксперт может исключить ответчика в качестве отца ребенка лишь по фактору Ld(a), а не по генотипам этой системы, поскольку пока еще не найдено антисыворотки анти-Ld, реагирующей на антиген, который является генетическим продуктом антитетического по отношению к аллелю Ld& аллеля Ld. Действительно, исключение ответчика, когда он и мать ребенка имеют фенотип Ld(a–), а ребенок – Ld(a+), очевидно. Но в настоящее время невозможно исключение ответчика по генотипам, когда он и мать ребенка имеют гомозиготный генотип Lda/Lda, а ребенок – гетерозиготный Ld*/Ld.
