Исследование выпотных жидкостей

В лабораторию доставляют всю полученную жидкость в чистой стеклянной посуде как можно быстрее, во избежание свертывания белка. Материал сопровождают направлением, в котором, помимо паспортных данных, указывают, откуда была получена жидкость, а также предположительный диагноз заболевания. Определяют физико-химические свойства транссудатов и экссудатов, а также проводят микроскопическое и бактериоскопическое исследование. Результаты исследования оформляют в бланке анализа.

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Пробирки.
2. Пипетки.
3. Цилиндр на 200 мл.
4. Предметные и покровные стекла.
5. Черная бумага.
6. Секундомер.
7. Набор для окраски по Цилю-Нильсену и Граму.
8. Ледяная уксусная кислота.
9. 50% раствор азотной кислоты.
10. Набор для окраски по Романовскому.

Определение физических свойств транссудатов и экссудатов

Определение физических свойств транссудатов и экссудатов (количества, цвета, характера, прозрачности, удельного веса) проводят, как при исследовании ликвора.

Химическое исследование выпотных жидкостей. Определение общего количества белка

Выпотную жидкость ввиду наличия в ней большого количества белка сначала разводят водой в 100 раз, а затем определяют количество белка по методу Робертса-Стольникова-Брандберга. Можно также определять белок по методу, усовершенствованному С. Л. Эрлихом и А. Я. Альтгаузеном. При этом исследуемую жидкость первоначально разводят в 64 раза. К 0,1 мл выпотной жидкости прибавляют 6,3 мл воды. (Методику определения белка но методу Робертса-Стольникова-Брандберга и С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена см. в подразделе статьи «Количественное определение белка в моче».)

Для отличия транссудата от экссудата пользуются реакцией Ривальта или Умбера.

Реакция Ривальта

В цилиндр емкостью 200-250 мл наливают дистиллированную воду, которую подкисляют несколькими каплями ледяной уксусной кислоты. В смесь вносят 1-2 капли исследуемой жидкости. Если жидкость — транссудат, то помутнения по ходу капли не появляется, и реакцию считают отрицательной; если жидкость — экссудат, то по ходу капли образуется беловатое облачко (напоминает дым от сигары), в этом случае реакцию считают положительной.

Реакция Умбера

Одну каплю хорошо отфильтрованной (до полной прозрачности) исследуемой жидкости помещают на предметное стекло и рядом наносят каплю ледяной уксусной кислоты. Если жидкость — экссудат, то на месте соприкосновения капель получается беловатая полоска, особенно четко видимая на черном фоне. В случае транссудата реакция Умбера отрицательна.

Микроскопическое исследование выпотных жидкостей

Для определения клеточного состава исследуемой выпотной жидкости проводят микроскопическое изучение нативных и окрашенных препаратов.

Нативные препараты готовят следующим образом: на предметные стекла помещают каплю отцентрифугированного осадка или частицы из свертков или сгустков. Накрывают их покровным стеклом и изучают под микроскопом вначале под малым, а затем под большим увеличением.

Окрашенные мазки готовят из нативных препаратов после их изучения. С этой целью с препаратов снимают покровное стекло, подсушивают мазки на воздухе, фиксируют и окрашивают по Романовскому в течение 3-5 минут, а затем исследуют под микроскопом с иммерсионной системой.

Клеточные элементы, встречающиеся в выпотных жидкостях. При микроскопическом изучении выпотных жидкостей могут быть обнаружены лейкоциты, эритроциты, мезотелий, макрофаги и элементы злокачественных новообразований (рис. 65).

Рис. 65. Клеточный состав транссудатов и экссудатов. 1 - в экссудате, 2 - в транссудате, 3-4 - атипический эпителий в выпотной жидкости.

Морфология нейтрофилов, эозинофилов, лимфоцитов, моноцитов в нативных и окрашенных препаратах практически не отличается от таковой в периферической крови.

Мезотелий — крупные, разной формы клетки с одним или двумя ядрами. В цитоплазме нередко выражена вакуолизация и жировая дистрофия. В окрашенных препаратах цитоплазма мезотелия окрашивается в синий цвет (базофильна).

Макрофаги — клетки обычно крупного размера с одним ядром, цитоплазма их нередко бывает вакуолизирована. В окрашенных препаратах цитоплазма синего цвета (базофильна) и иногда содержит микроорганизмы, обломки эритроцитов, лейкоцитов.

Элементы злокачественных новообразований — в виде полиморфных атипичных клеток, в цитоплазме которых выявляется вакуолизация или жировая дистрофия. Они располагаются отдельно и в виде компактных округлых групп или железистоподобных образований. Некоторые клетки злокачественных новообразований называют перстневидным и они имеют вакуоль, занимающую большую часть цитоплазмы, и ядро, оттесненное к периферии клетки.

Среди тесных групп атипичных клеток обнаруживают известковые образования — псаммозные тельца , которые представляют собой концентрические слоистые образования, располагающиеся в центре округлых групп из атипичных клеток. Их изучают в нативном препарате под малым и большим увеличением микроскопа.

При окраске по Романовскому клетки злокачественного новообразования различной величины и формы. Ядро занимает большую часть цитоплазмы. В ядрах клеток обнаруживают ядрышки.

Цитоплазма атипичных клеток окрашивается базофильно и в ней нередко выявляется жировая дистрофия и вакуолизация.

Бактериоскопическое исследование выпотных жидкостей

Для бактериоскопического исследования выпотных жидкостей готовят 2 препарата из осадка, свертков или сгустков. С этой целью материал помещают на предметные стекла, после их подсыхания фиксируют троекратным проведением над пламенем горелки и окрашивают один препарат по Граму, а другой — по Цилю-Нильсену (технику окраски и микроскопирования см. в статье «Бактериоскопическое исследование мокроты»). В окрашенных препаратах могут быть обнаружены стафилококки, стрептококки, диилококки и микооактерии туберкулеза. Отличительные свойства транссудатов и экссудатов приведены ниже.

Исследование жидкости из эхинококкового пузыря

При изучении жидкости из эхинококкового пузыря в ней определяют физические свойства, белок, янтарную кислоту и проводят микроскопическое исследование.

1. Определение физических свойств — цвета, прозрачности и других — проводится так же, как в ликворе (см. статью «Определение физических свойств ликвора»).
2. Определение белка проводится так же, как в моче (см. тему «Химическое исследование мочи», раздел «Количественное определение белка в моче»).
3. Определение янтарной кислоты. Исследуемую жидкость помещают в фарфоровую чашку и выпаривают до консистенции сиропа. Чашку снимают с нагревательного прибора, дают жидкости остыть и приливают к ней соляную кислоту до получения кислой реакции под контролем лакмусовой бумажки. Затем для извлечения янтарной кислоты приливают смесь Никифорова (эфир, наполовину смешанный с 96° этиловым спиртом). Полученную эфирно-спиртовую вытяжку сливают в химический стаканчик, который устанавливают в водяную баню, и выпаривают. Янтарная кислота выпадает в виде кристаллов.

Структуру полученных кристаллов изучают с помощью микроскопа под малым и большим увеличением. Кристаллы янтарной кислоты имеют вид шестиугольных таблиц или призм.

Техника микроскопического исследования

Готовят нативные препараты. С этой целью жидкость выливают в чашку Петри, а затем с помощью шпателя и иглы на предметное стекло помещают отобранные частицы, добавляют каплю исследуемой жидкости и накрывают покровным стеклом. Приготовленные препараты микроскопируют при малом и большом увеличении. При микроскопическом исследовании обнаруживают крючья паразита, оболочку эхинококкового пузыря и в некоторых случаях сколексы (головки) с двумя венчиками крючьев и четырьмя присосками (см. рис. 59).

Рис. 59. Элементы эхинококка. 1 - пленка эхинококкового пузыря, 2 - крючья эхинококка, 3 - сколексы