Определение кислотности желудочного содержимого

Для проведения данных исследований рабочее место должно быть оснащено следующими элементами:

1. Пипетки на 5-10 мл.
2. Химический стаканчик.
3. Марля.
4. Установка для титрования.
5. Диметиламидоазобензол.
6. Фенолфталеин.
7. Едкий натр.
8. Ализаринсульфоновокислый натрий.
9. Спирт 96° (этиловый).

К определению кислотности желудочного содержимого приступают после определения физических свойств и приготовления препаратов для микроскопии.

Устанавливают: а) общую кислотность — сумму всех кислореагирующих соединений желудочного содержимого, которую составляют свободная соляная кислота, связанная соляная кислота, органические кислоты и кислые однозамещенные фосфаты; б) свободную соляную кислоту; в) связанную соляную кислоту, находящуюся в соединении с белками и продуктами их переваривания.

Определение кислотности производят путем титрования желудочного содержимого 0,1 N раствором щелочи (реакция нейтрализации). Результаты определения кислотности выражают в миллилитрах 0,1 N раствора щелочи, пошедшей на титрование 100 мл желудочного содержимого. Кислотность определяют в свежеполученном желудочном содержимом, так как при его стоянии изменяется общая кислотность в результате деятельности различных микроорганизмов, а также изменяется соотношение между свободной и связанной соляной кислотой вследствие продолжающихся пищеварительных процессов.

В норме для желудочного содержимого характерны такие показатели кислотности: свободная соляная кислота — 20-40 мл 0,1 N раствора щелочи, связанная соляная кислота — 10-12 мл, общая кислотность — 40-60 мл 0,1 N раствора щелочи.

Определение свободной соляной кислоты в желудочном содержимом по Тепферу

Для определения кислотности желудочного содержимого по Тепферу необходимы следующие реактивы:

1. 0,5% спиртовой раствор диметиламидоазобензола: 0,5 г диметиламидоазобензола помещают в мерный 100-миллилитровый цилиндр и доливают до метки этиловым спиртом. Раствор наливают в капельницу.
2. 1 % спиртовой раствор фенолфталеина: 1 г фенолфталеина помещают в мерный цилиндр на 100 мл и доливают до метки этиловым спиртом. Раствор переливают в капельницу.
3. 0,1 N раствор едкого натра (приготовление см. в теме «Определение глюкозы в крови»).
4. 1% раствор ализаринсульфоновокислого натрия: 1г реактива помещают в цилиндр на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки.

Техника определения. Определение кислотности желудочного содержимого по методу Тепфера ведут в двух отдельных порциях желудочного содержимого.

В первой порции определяют свободную соляную кислоту и общую кислотность, во второй — связанную соляную кислоту.

Титрование первой порции желудочного содержимого производят следующим образом. В первый химический стаканчик помещают 5 или 10 мл профильтрованного желудочного содержимого и сюда же приливают из капельницы 1-2 капли индикатора — 0,5% раствора диметиламидоазобензола. В присутствии свободной соляной кислоты желудочное содержимое окрашивается в красный цвет, если же ее нет, то оно окрашивается в оранжевый цвет. Устанавливают и записывают уровень 0,1 N раствора щелочи в бюретке. Затем титруют желудочное содержимое 0,1 N раствором щелочи до появления желтовато-красного окрашивания. Количество израсходованной на титрование щелочи записывают. Вслед за этим к желудочному содержимому приливают из капельницы 1-2 капли индикатора — 1 % раствора фенолфталеина. Цвет желудочного содержимого при этом не изменяется. Производят второе титрование до появления стойкого розового окрашивания. Отмечают количество щелочи, израсходованной на титрование. Эту цифру записывают. По первой цифре титрования рассчитывают свободную соляную кислоту, а по второй — общую кислотность.

Индикатор диметиламидоазобензол реагирует только в присутствии свободной соляной кислоты и окрашивает желудочное содержимое в красный цвет; в момент полной нейтрализации свободной соляной кислоты щелочью индикатор изменяет окраску и желудочное содержимое окрашивается в желтовато-красный цвет. Этот момент соответствует окончанию первого титрования. Индикатор фенолфталеин, добавляемый после окончания первого титрования, не изменяет окраски желудочного содержимого, так как реагирует в момент перехода кислой реакции в щелочную. Фенолфталеин придает желудочному содержимому розовый оттенок в момент полной нейтрализации всех кислореагирующих веществ. Изменение окраски свидетельствует об окончании второго титрования.

Пример расчета. Взято 5 мл желудочного содержимого. Уровень 0,1 N раствора щелочи установлен на деление «0». На первое титрование израсходовано 1 мл 0,1 N раствора щелочи, на второе титрование — 2 мл. На 100 мл желудочного содержимого израсходовано 0,1 N раствора щелочи в 20 раз больше: первое титрование 1X20 = 20 мл 0,1 N раствора щелочи, второе титрование 2X 20 = 40 мл 0,1 N раствора щелочи.

Ответ: свободная соляная кислота — 20, общая кислотность — 40.

При титровании 10 мл желудочного содержимого получающиеся цифры умножают на 10.
Если исходный уровень 0,1 N раствора щелочи находится не на «0», то при расчетах из каждой цифры титрования вычитают цифру исходного уровня, записанную до титрования. Количество свободной соляной кислоты часто высчитывают в процентах. С этой целью количество израсходованного на первое титрование 0,1 N раствора щелочи умножают на 0,00365 (1 мл 0,1 N раствора щелочи нейтрализует 0,00365 г свободной соляной кислоты). Чтобы не производить расчеты, пользуются таблицей (табл. 3).

В норме свободная соляная кислота составляет 0,09— 0,16%. Об отсутствии свободной соляной кислоты в желудочном содержимом судят по появлению оранжевой окраски при добавлении 0,5% раствора диметиламидоазобензола. В этом случае к желудочному содержимому прибавляют 1-2 капли 1% раствора фенолфталеина и титруют до появления стойкого розового окрашивания.

Пример расчета. Для титрования взято 5 мл исследуемого желудочного содержимого. Исходный уровень 0,1 N раствора щелочи в бюретке у деления «0». Титрование заканчивается в момент появления стойкого розового окрашивания желудочного содержимого, уровень 0,1 N раствора щелочи в бюретке у деления шкалы 0,5. 0,5 X 20 = 10 мл 0,1 N раствора щелочи.
Ответ: свободная соляная кислота — 0, общая кислотность — 10.
Вторую порцию желудочного содержимого используют для определения связанной соляной кислоты.

Определение связанной соляной кислоты с 1 % раствором ализаринсульфоновокислого натрия

Как было указано выше, во второй химический стаканчик помещают 5 или 10 мл профильтрованного желудочного содержимого и прибавляют 1-2 капли 1% водного раствора ализаринсульфоновокислого натрия, после чего желудочное содержимое окрашивается в желтый цвет. Отмечают и записывают исходный уровень 0,1 N раствора щелочи. Титруют 0,1 N раствором щелочи через красный цвет до насыщенно-фиолетового. В этот момент нейтрализованы все вещества кислой реакции, за исключением связанной соляной кислоты. Отмечают количество миллилитров 0,1 N раствора щелочи, израсходованного на титрование, например: на титрование 5 мл исследуемого желудочного содержимого израсходовано 2,5 мл 0,1 N раствора щелочи (исходный уровень щелочи — на делении «0»).

Для расчета связанной соляной кислоты используют данные, получаемые при определении общей кислотности в первой и второй порциях желудочного содержимого. Например, при установлении общей кислотности по методу Тепфера в первой порции израсходовано 3 мл 0,1 N раствора щелочи, а во второй порции — 2,5 мл. Количество миллилитров щелочи, необходимой для нейтрализации связанной соляной кислоты, составит: 3,0 - 2,5 = 0,5 мл 0,1 N раствора щелочи. 0,5 X 20 = 10 мл 0,1 N раствора щелочи. Количество связанной кислоты равно 10.

Определение кислотности желудочного содержимого по Михаэлису

Пользуясь методом Михаэлиса, устанавливают в одной и той же порции желудочного содержимого количество свободной соляной кислоты, связанной соляной кислоты и общую кислотность.
В химический стаканчик помещают 5 или 10 мл профильтрованного желудочного содержимого. Последовательно приливают по 1-2 капли 0,5% раствора диметиламидоазобензола и 1% раствора фенолфталеина. Устанавливают и записывают исходный уровень 0,1 N раствора щелочи в бюретке. Титруют трижды: первый раз — от красного цвета до оранжевого с розоватым оттенком (цвет «семги»), второй раз — от цвета «семги» до лимонно-желтого цвета, третий раз — от лимонно-желтого цвета до стойкого розового окрашивания. Каждый раз записывают количество израсходованной щелочи.

Пример расчета. Исходный уровень 0,1 N раствора щелочи — 3,7; уровень щелочи при окончании первого титрования — 4,7; второго титрования — 5,0 и третьего — 5,7. Расчет свободной соляной кислоты производят по цифре первого титрования, а общей кислотности — по цифре третьего титрования. Так как титровалось 5 мл исследуемого желудочного содержимого, то цифры титрования умножают на 20. На первое титрование израсходовано 4,7— 3,7 = 1 мл 0,1 N раствора щелочи, на второе титрование израсходовано 5—3,7 = 1,3 мл 0,1 N раствора щелочи, на третье титрование израсходовано 5,7—3,7 = 2 мл 0,1 N раствора щелочи. Отсюда 1 X 20 = 20 мл 0,1 N раствора щелочи — свободная соляная кислота, 2 X 20 = 40 мл 0,1 N раствора щелочи — общая кислотность.

Связанную соляную кислоту рассчитывают следующим образом: находят среднее арифметическое из цифр второго и третьего титрований и результат умножают на 20. Получают общее количество соляной кислоты. Из полученной цифры вычитают известное количество свободной соляной кислоты. Это и будет связанная соляная кислота, для данного примера: 1,65X20 = 33; 33-20 = 13.
Ответ: связанная соляная кислота—13.

Если при прибавлении индикаторов желудочное содержимое окрашивается в желтый цвет, то свободную и связанную соляную кислоту не определяют, а устанавливают лишь общую кислотность. Получение же оранжевого с розоватым оттенком цвета (цвета «семги») свидетельствует об отсутствии лишь свободной соляной кислоты. В этом случае определяют только связанную соляную кислоту и общую кислотность. Из примеров видно, что сумма свободной и связанной соляной кислоты несколько меньше цифры общей кислотности. Это объясняют тем, что часть 0,1 N раствора щелочи расходуется на нейтрализацию органических кислот и однозамещенных фосфатов.

Определение кислотности и дебит-часа соляной кислоты в желудочном содержимом, взятом фракционным способом

Каждую порцию желудочного содержимого, полученную многомоментным способом, титруют отдельно, используя методы Тепфера или Михаэлиса. Получаемые цифры кислотности указывают на состояние желудочной секреции в динамике. На практике часто используют фракционный способ получения желудочного содержимого по Н. И. Лепорскому   или по Зимницкому, т. е. получают натощак через тонкий зонд с помощью шприца все желудочное содержимое, затем вводят 200 мл теплого мясного бульона (завтрак Зимницкого). Зонд оставляют в желудке. Накладывают зажим. Через 15, 30, 45 минут получают по 10-15 мл желудочного содержимого и через 60 минут извлекают весь остаток. Всего получают четыре порции желудочного содержимого. Затем вторично вводят 200 мл завтрака Зимницкого и получают по такой же схеме четыре порции желудочного содержимого. Зонд удаляют.

В каждой из девяти полученных порций устанавливают общую кислотность, связанную и свободную соляную кислоту. Затем определяют дебит соляной кислоты (показатель кислотообразующей функции желудка) в определенные промежутки времени. Этот показатель выражают в миллиграммах соляной кислоты. Для расчета дебит-часа соляной кислоты необходимо иметь следующие показатели:

1. количество желудочного сока в каждой порции;
2. количество свободной соляной кислоты в каждой порции, полученное в результате определения кислотности желудочного содержимого.

Дебит соляной кислоты вычисляют в каждой порции желудочного сока по следующей формуле:
Дебит соляной кислоты = А х В х 3,65, где А — количество желудочного сока данной порции в миллилитрах; В — количество свободной соляной кислоты данной порции; 3,65 — количество соляной кислоты в миллиграммах, которое соответствует при титровании 1 мл 0,1 N раствора NaOH.

Затем определяют дебит соляной кислоты отдельно за первый час (первая фаза секреции) и за второй час (вторая фаза секреции), для чего суммируют раздельно количество миллиграммов соляной кислоты первых четырех порций желудочного сока и последующих четырех порций.
Полученные цифры соответствуют содержанию свободной соляной кислоты первой и второй фаз секреции.

Нормальные показатели дебит-часа в первую фазу секреции 40-150 мг, во вторую фазу — 40-220 мг.